| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第12-37页 |
| ·褐飞虱的研究进展 | 第12-16页 |
| ·褐飞虱对水稻的危害 | 第12页 |
| ·褐飞虱研究进展 | 第12-16页 |
| ·宏观生物学研究进展 | 第13-15页 |
| ·微观生物学研究进展 | 第15-16页 |
| ·cDNA文库构建的研究进展 | 第16-27页 |
| ·构建cDNA文库的意义 | 第16页 |
| ·cDNA文库的用途 | 第16页 |
| ·全长cDNA文库构建方法研究进展 | 第16-23页 |
| ·SMART法 | 第17-19页 |
| ·Oligo-capping法 | 第19页 |
| ·CAPture法 | 第19-21页 |
| ·Cap-trapper法 | 第21-23页 |
| ·均一化文库构建研究进展 | 第23-27页 |
| ·cDNA样品与基因组 DNA饱和杂交法 | 第23-25页 |
| ·复性式均一化法 | 第25-27页 |
| ·EST技术研究概况 | 第27-35页 |
| ·EST的概念及研究进展 | 第27-30页 |
| ·EST的应用 | 第30-32页 |
| ·构建基因组图谱 | 第30页 |
| ·分离与鉴定新基因 | 第30-31页 |
| ·用于基因表达谱的研究 | 第31页 |
| ·制备 DNA芯片 | 第31-32页 |
| ·生物信息学在 EST分析中的应用 | 第32-35页 |
| ·生物信息学概述 | 第32页 |
| ·生物信息学数据库 | 第32-33页 |
| ·生物信息学在 EST数据分析中的作用 | 第33-35页 |
| ·生物信息学分析软件 | 第33-34页 |
| ·生物信息学技术在 EST数据分析中的应用 | 第34-35页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第35-37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-57页 |
| ·试验材料 | 第37-38页 |
| ·供试昆虫 | 第37页 |
| ·EST分析材料 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37-38页 |
| ·所用引物序列 | 第38页 |
| ·试验方法 | 第38-57页 |
| ·褐飞虱若虫总 RNA的提取 | 第38-40页 |
| ·试验材料预处理 | 第38页 |
| ·Trizol试剂提取总 RNA | 第38-40页 |
| ·总 RNA的浓度测定和质量鉴定 | 第40页 |
| ·非均一化cDNA文库的构建 | 第40-47页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第40页 |
| ·LD-PCR进行cDNA第二条链的合成 | 第40-41页 |
| ·蛋白酶 K消化 | 第41-42页 |
| ·Sfil酶切消化 | 第42页 |
| ·cDNA片段分级分离 | 第42-43页 |
| ·cDNA与载体λTripl-Ex2连接并包装 | 第43-44页 |
| ·未扩增文库滴度测定 | 第44页 |
| ·重组克隆效率的确定 | 第44页 |
| ·文库扩增及滴度测定 | 第44-45页 |
| ·噬菌体文库环化成质粒文库 | 第45页 |
| ·插入片段长度鉴定 | 第45-47页 |
| ·测序鉴定文库质量 | 第47页 |
| ·均一化cDNA文库的构建 | 第47-55页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第48页 |
| ·LD-PCR进行双链cDNA的合成 | 第48-49页 |
| ·PCR产物纯化 | 第49页 |
| ·均一化处理 | 第49-53页 |
| ·DSN的稀释 | 第49-50页 |
| ·杂交 | 第50页 |
| ·DSN处理 | 第50-51页 |
| ·均一化cDNA的第一次 PCR扩增 | 第51-52页 |
| ·均一化cDNA的第二次 PCR扩增 | 第52-53页 |
| ·Sfil酶切 | 第53页 |
| ·目的片段回收 | 第53-54页 |
| ·连接转化 | 第54页 |
| ·均一化文库质量的检测 | 第54-55页 |
| ·文库滴度测定 | 第54页 |
| ·文库插入片段长度及重组率鉴定 | 第54-55页 |
| ·文库均一化效果鉴定 | 第55页 |
| ·EST的生物信息学分析方法 | 第55-57页 |
| ·EST序列的处理及聚类拼接 | 第55-56页 |
| ·同源性比对及功能分析 | 第56-57页 |
| 3 结果与分析 | 第57-70页 |
| ·褐飞虱若虫总 RNA的提取 | 第57页 |
| ·非均一化cDNA文库构建的结果与分析 | 第57-60页 |
| ·褐飞虱若虫cDNA的合成及扩增 | 第57-58页 |
| ·cDNA分级分离 | 第58页 |
| ·文库滴度与重组百分率 | 第58-59页 |
| ·扩增后文库的滴度 | 第59页 |
| ·质粒文库的酶切鉴定 | 第59页 |
| ·测序结果 | 第59-60页 |
| ·均一化cDNA文库构建的结果与分析 | 第60-63页 |
| ·LD-PCR合成双链cDNA | 第60页 |
| ·均一化处理结果 | 第60-62页 |
| ·文库质量鉴定 | 第62-63页 |
| ·EST的生物信息学分析结果 | 第63-70页 |
| ·测序结果拼接分析 | 第63-64页 |
| ·EST序列同源性比较及基因功能分析 | 第64-66页 |
| ·与NCBI的核苷酸数据库比对(BLASTn)结果 | 第64页 |
| ·与NCBI的蛋白质数据库比对(BLASTx)结果 | 第64-66页 |
| ·与褐飞虱生长发育可能有显著影响的基因 | 第66-70页 |
| 4 讨论 | 第70-76页 |
| ·褐飞虱总 RNA的提取 | 第70页 |
| ·两种 SMART技术建库方法的比较 | 第70-71页 |
| ·Creator SMART技术和 DSN均一化相结合方法的优点 | 第71-72页 |
| ·全长cDNA文库的质量评价 | 第72-74页 |
| ·EST测序起点的选择 | 第74页 |
| ·BLASTn和 BLASTx比对分析结果差异 | 第74-75页 |
| ·与褐飞虱 EST库的比对 | 第75页 |
| ·褐飞虱重要基因的研究 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
