| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 引言 | 第12-14页 |
| 第一章 人胎儿角膜内皮细胞体外培养 | 第14-43页 |
| ·材料和方法 | 第14-23页 |
| ·实验材料 | 第14页 |
| ·手术器材 | 第14页 |
| ·实验仪器 | 第14页 |
| ·试验耗材 | 第14页 |
| ·试验试剂 | 第14-15页 |
| ·试剂配制 | 第15页 |
| ·DMEM、DMEM/F12的配制 | 第15页 |
| ·胰蛋白酶/EDTA的配制 | 第15页 |
| ·0.02M PBS配制 | 第15页 |
| ·细胞培养相关操作 | 第15-18页 |
| ·细胞培养方法 | 第15-17页 |
| ·胎儿或牛角膜内皮细胞的培养 | 第15-16页 |
| ·胎儿角膜基质细胞组织块法培养 | 第16-17页 |
| ·细胞培养液的配制 | 第17页 |
| ·配制成品培养液 | 第17页 |
| ·配制人胎儿角膜基质细胞条件培养液 | 第17页 |
| ·配制牛角膜内皮细胞裂解液 | 第17页 |
| ·制备促进人角膜内皮细胞贴壁生长的培养板或皿 | 第17页 |
| ·FNC包被培养板或皿 | 第17页 |
| ·牛角膜内皮细胞胞外基质包被培养板或皿 | 第17页 |
| ·细胞传代方法 | 第17页 |
| ·细胞计数 | 第17-18页 |
| ·细胞冻存与复苏 | 第18页 |
| ·细胞冻存 | 第18页 |
| ·复苏方法 | 第18页 |
| ·细胞相关检测 | 第18-23页 |
| ·实验试剂 | 第18-19页 |
| ·实验仪器 | 第19页 |
| ·实验方法及步骤 | 第19-23页 |
| ·MTT检测方法 | 第19-20页 |
| ·BCA蛋白定量 | 第20页 |
| ·细胞免疫荧光鉴定 | 第20页 |
| ·RT-PCR检测方法 | 第20-23页 |
| ·β-半乳糖苷酶原位染色 | 第23页 |
| ·统计学方法 | 第23页 |
| ·实验结果 | 第23-25页 |
| ·倒置显微镜下观察胎儿角膜内皮细胞的生长情况 | 第23-24页 |
| ·胎儿角膜内皮细胞原代和传代培养 | 第23-24页 |
| ·细胞传代、冻存复苏 | 第24页 |
| ·β-半乳糖苷酶原位染色 | 第24-25页 |
| ·免疫荧光染色 | 第25页 |
| ·MTT法分析角膜内皮细胞的增殖 | 第25页 |
| ·BCA蛋白定量测条件培养液、牛碎破细胞液蛋白含量 | 第25页 |
| ·RT-PCR检测结果 | 第25页 |
| ·讨论 | 第25-31页 |
| 附图 | 第31-41页 |
| 参考文献 | 第41-43页 |
| 第二章 免疫荧光染色检测胎儿角膜内皮细胞及角膜缘干细胞 | 第43-48页 |
| ·材料和方法 | 第43-44页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·手术器材 | 第43页 |
| ·实验仪器 | 第43页 |
| ·试验试剂 | 第43页 |
| ·实验步骤 | 第43-44页 |
| ·HE染色结果 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 第三章 综述 | 第48-57页 |
| 正文 | 第48-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第57-58页 |
| 附录 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-61页 |