| 目录 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 英文略语表 | 第10-13页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 1 实验材料 | 第15-21页 |
| ·质粒 | 第15页 |
| ·菌株 | 第15-16页 |
| ·细胞株 | 第16页 |
| ·主要仪器设备 | 第16页 |
| ·工具酶、酶切缓冲液及DNA Marker | 第16-17页 |
| ·主要化学试剂 | 第17页 |
| ·细胞培养用耗材 | 第17页 |
| ·试剂盒 | 第17页 |
| ·主要溶液配方 | 第17-20页 |
| ·培养基的配制 | 第17-18页 |
| ·制备感受态细胞相关溶液 | 第18页 |
| ·抗生素的配制 | 第18页 |
| ·大量提取质粒DNA的相关溶液 | 第18页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳缓冲液及凝胶的配制 | 第18-19页 |
| ·细胞冻存液的配制 | 第19页 |
| ·细胞裂解液的配制 | 第19页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质电泳及相关缓冲液的配制 | 第19页 |
| ·蛋白纯化相关缓冲液配制 | 第19-20页 |
| ·常用缓冲液的配制 | 第20页 |
| ·细胞免疫荧光实验缓冲液的配制 | 第20页 |
| ·PCR引物 | 第20页 |
| ·主要抗体 | 第20-21页 |
| 2 实验方法 | 第21-40页 |
| ·乳铁蛋白(lactoferrin)的PCR引物设计 | 第21-23页 |
| ·PCR扩增 | 第23页 |
| ·酶切消化 | 第23-24页 |
| ·连接 | 第24页 |
| ·转化 | 第24页 |
| ·鉴定 | 第24-25页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·质粒DNA的小提 | 第26页 |
| ·质粒DNA的大量提取 | 第26-27页 |
| ·重组质粒DNA浓度的测定 | 第27页 |
| ·DNA的线性化及纯化回收 | 第27页 |
| ·贴壁细胞培养 | 第27-28页 |
| ·稳定表达细胞株的构建 | 第28页 |
| ·细胞冻存 | 第28页 |
| ·细胞复苏 | 第28-29页 |
| ·细胞裂解 | 第29页 |
| ·Western Blotting检测方法 | 第29-30页 |
| ·SARS-CoV刺突蛋白S1190-Fc及对照Fc蛋白的制备 | 第30-31页 |
| ·假病毒的包装 | 第31页 |
| ·假病毒滴度测定 | 第31页 |
| ·荧光显微镜观察乳铁蛋白抑制SARS假病毒感染293E-ACE2-Myc细胞 | 第31-32页 |
| ·Western blot分析乳铁蛋白抑制SARS假病毒感染293E-ACE2-Myc细胞情况 | 第32页 |
| ·流式细胞术检测乳铁蛋白抑制SARS假病毒感染293E-ACE2-Myc细胞情况 | 第32-33页 |
| ·乳铁蛋白抑制SARS-CoV刺突蛋白S1190-Fc结合293E-ACE2-Myc细胞检测 | 第33-34页 |
| ·ELISA检测乳铁蛋白对S1190-Fc和293E-ACE2-Myc结合的影响 | 第34页 |
| ·乳铁蛋白荧光标记 | 第34-35页 |
| ·Confocal检测乳铁蛋白在293E-ACE2-Myc细胞上的定位 | 第35页 |
| ·肝素对乳铁蛋白结合293E-ACE2-Myc细胞的影响 | 第35-36页 |
| ·肝素对乳铁蛋白抑制S1190-Fc结合293E-ACE2-Myc细胞的中和作用 | 第36页 |
| ·肝素对乳铁蛋白抑制SARS假病毒进入293E-ACE2-Myc细胞的中和作用 | 第36-37页 |
| ·肝素对Spike蛋白结合到293E-ACE2-Myc细胞上的抑制作用 | 第37-38页 |
| ·肝素对SARS假病毒感染293E-ACE2-Myc细胞的抑制作用 | 第38页 |
| ·肝素酶消化细胞表面的硫酸乙酰肝素对Spike蛋白结合到293E-ACE2-Myc细胞上的抑制作用 | 第38-39页 |
| ·肝素酶消化细胞表面的硫酸乙酰肝素对SARS假病毒感染293E-ACE2-Myc细胞的抑制作用 | 第39-40页 |
| 3 实验结果 | 第40-56页 |
| ·构建pEAK13CD5L-LF-TEVFc和pEAK13CD5L-LF质粒 | 第40-41页 |
| ·瞬时转染细胞,Western Blot检测乳铁蛋白的表达 | 第41页 |
| ·SARS假病毒的包装 | 第41-42页 |
| ·SARS假病毒的滴度测定 | 第42-44页 |
| ·S1190-Fc及Fc蛋白的表达纯化 | 第44页 |
| ·乳铁蛋白能够抑制SARS假病毒进入293E-ACE2-Myc细胞 | 第44-47页 |
| ·乳铁蛋白能够抑制SARS-CoV的Spike蛋白结合到宿主细胞上 | 第47-48页 |
| ·乳铁蛋白不干扰Spike蛋白和ACE2的相互作用 | 第48页 |
| ·乳铁蛋白结合于细胞表面的硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG) | 第48-50页 |
| ·肝素可以中和乳铁蛋白对Spike蛋白的抑制作用 | 第50-51页 |
| ·肝素可以部分中和乳铁蛋白对SARS假病毒进入293E-ACE2-Myc细胞的抑制作用 | 第51-52页 |
| ·肝素可以抑制Spike蛋白结合到293E-ACE2-Myc细胞上 | 第52-53页 |
| ·肝素可以抑制SARS假病毒感染293E-ACE2-Myc细胞 | 第53页 |
| ·肝素酶消化细胞表面的硫酸乙酰肝素可以抑制Spike蛋白结合到293E-ACE2-Myc细胞上 | 第53-54页 |
| ·肝素酶消化细胞表面的硫酸乙酰肝素可以抑制SARS假病毒感染293E-ACE2-Myc细胞 | 第54-56页 |
| 4 讨论 | 第56-59页 |
| 5 参考文献 | 第59-66页 |
| 综述1 | 第66-76页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 综述2 | 第76-81页 |
| 参考文献 | 第78-81页 |
| 致谢 | 第81-83页 |
| 个人简历 | 第83-84页 |
