蜜蜂白垩病分子诊断技术的研究
| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-22页 |
| 1 引言 | 第13页 |
| 2 蜜蜂白垩病病原学研究进展 | 第13-15页 |
| 3 蜜蜂对白垩病的抗性机制研究 | 第15-16页 |
| 4 蜜蜂白垩病的传统鉴定和诊断方法 | 第16-17页 |
| 5 分子鉴定和诊断技术概述 | 第17-18页 |
| 6 白垩病分子鉴定和诊断技术的研究基础 | 第18-20页 |
| 7 本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二部分 蜜蜂白垩病分子诊断技术的构建 | 第22-54页 |
| 第一章 蜜蜂白垩病诊断分子标记的克隆 | 第22-37页 |
| 1 材料与方法 | 第23-29页 |
| ·材料 | 第23-24页 |
| ·菌株及载体 | 第23页 |
| ·试剂和仪器 | 第23-24页 |
| ·试剂 | 第23页 |
| ·仪器 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-29页 |
| ·蜜蜂球囊菌的纯化培养 | 第24页 |
| ·马铃薯PDA 培养基的配制 | 第24页 |
| ·蜜蜂球囊菌的分离纯化 | 第24页 |
| ·细菌培养 | 第24-25页 |
| ·LB 培养基的配制 | 第24-25页 |
| ·细菌培养 | 第25页 |
| ·蜜蜂球囊菌基因组DNA 的制备 | 第25页 |
| ·感受态细胞制备 | 第25-26页 |
| ·引物的设计 | 第26页 |
| ·诊断分子标记的PCR 扩增 | 第26-27页 |
| ·聚合酶链式反应（PCR） | 第26页 |
| ·PCR 扩增产物的凝胶电泳分析 | 第26-27页 |
| ·诊断分子标记的克隆 | 第27-29页 |
| ·PCR 产物的纯化回收 | 第27页 |
| ·连接反应 | 第27-28页 |
| ·重组质粒的转化和重组子的筛选 | 第28页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第28-29页 |
| ·测序分析 | 第29页 |
| 2 结果与分析 | 第29-36页 |
| ·菌丝体基因组DNA 的提取 | 第29-30页 |
| ·诊断分子标记的克隆 | 第30-34页 |
| ·PCR 扩增与产物回收 | 第30-31页 |
| ·连接与转化 | 第31页 |
| ·重组质粒 DNA 的提取 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定 | 第32页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第32-34页 |
| ·诊断分子标记的序列分析 | 第34-36页 |
| 3 讨论 | 第36-37页 |
| 第二章 蜜蜂白垩病诊断分子标记的特异性验证 | 第37-41页 |
| 1 材料与方法 | 第37-39页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·蜜蜂与菌株 | 第37页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-39页 |
| ·蜜蜂基因组 DNA 的提取 | 第37-38页 |
| ·真菌基因组 DNA 的提取 | 第38页 |
| ·细菌基因组 DNA 的提取 | 第38页 |
| ·聚合酶链式反应（PCR） | 第38-39页 |
| 2 结果与分析 | 第39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 诊断分子标记的灵敏性测定 | 第41-47页 |
| 1 材料与方法 | 第41-42页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·菌株 | 第41页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-42页 |
| ·蜜蜂球囊菌基因组 DNA 的提取 | 第41页 |
| ·DNA 样品原液浓度的测定及纯度判定 | 第41-42页 |
| ·聚合酶链式反应（PCR） | 第42页 |
| ·诊断分子标记灵敏性的测定 | 第42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-45页 |
| ·菌丝体基因组DNA 的提取 | 第42-43页 |
| ·DNA样品原液浓度的测定及纯度判定 | 第43页 |
| ·诊断分子标记的灵敏性测定 | 第43-45页 |
| 3 讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 蜜蜂白垩病诊断分子标记的适用性检验 | 第47-52页 |
| 1 材料与方法 | 第47-48页 |
| ·材料 | 第47-48页 |
| ·蜜蜂和蜜蜂球囊菌 | 第47页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第47-48页 |
| ·方法 | 第48页 |
| ·基因组 DNA 的提取 | 第48页 |
| ·聚合酶链式反应（PCR） | 第48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-50页 |
| 3 讨论 | 第50-52页 |
| 第五章 结论 | 第52-54页 |
| 第三部分 中华蜜蜂白垩病的分子诊断 | 第54-67页 |
| 1 材料与方法 | 第54-55页 |
| ·材料 | 第54页 |
| ·蜜蜂和蜜蜂球囊菌 | 第54页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第54页 |
| ·方法 | 第54-55页 |
| ·病原菌的分离与纯化 | 第54页 |
| ·病原菌的形态学等特征初步鉴定 | 第54-55页 |
| ·病原真菌基因组 DNA 的提取 | 第55页 |
| ·聚合酶链式反应（PCR） | 第55页 |
| 2 结果与分析 | 第55-59页 |
| ·病原菌的形态学等特征初步鉴定 | 第55-57页 |
| ·病原菌的诊断分子标记鉴定 | 第57-59页 |
| 3 讨论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 附录Ⅰ培养基和缓冲液配方 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
