| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 1 绪论 | 第12-18页 |
| ·乳腺癌治疗难点与分子靶向治疗(Targeted Therapy) | 第12页 |
| ·癌症发生与表观遗传变异(Epigenetic Variation) | 第12-13页 |
| ·SMYD3 于多种癌症发生、发展中的作用 | 第13-16页 |
| ·SMYD3 与细胞增殖 | 第13-14页 |
| ·SMYD3 与侵袭和凋亡 | 第14-15页 |
| ·SMYD3 与c-Myc 调控 | 第15-16页 |
| ·SMYD3 自身变异与肿瘤发生 | 第16页 |
| ·SMYD3 于乳腺癌发生、发展中的作用研究现状 | 第16-18页 |
| 2 靶向SMYD3 的microRNA 真核表达载体的构建及其沉默效应检测 | 第18-40页 |
| ·材料与试剂 | 第18页 |
| ·细胞株 | 第18页 |
| ·试剂 | 第18页 |
| ·常用溶液的配制 | 第18页 |
| ·主要仪器 | 第18页 |
| ·方法 | 第18-31页 |
| ·细胞培养 | 第18-19页 |
| ·重组质粒的构建 | 第19-23页 |
| ·脂质体介导的细胞转染 | 第23-26页 |
| ·RT-PCR 检测各组细胞转染前后SMYD3 mRNA 沉默效果 | 第26-28页 |
| ·Westeron blot 检测转染前后各组细胞SMYD3 蛋白的沉默效果 | 第28-30页 |
| ·统计学处理 | 第30-31页 |
| ·结果 | 第31-38页 |
| ·SMYD3 microRNA 的构建 | 第31-32页 |
| ·稳定转染效率鉴定 | 第32-37页 |
| ·SMYD3 沉默效果的检测 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| 3 沉默SMYD3 对乳腺癌MCF-7 细胞生物学行为的影响 | 第40-46页 |
| ·材料与试剂 | 第40页 |
| ·细胞株 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40页 |
| ·常用溶液的配制 | 第40页 |
| ·主要仪器 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-42页 |
| ·实验分组 | 第40页 |
| ·MTT 法检测稳定转染前后各组细胞的生长情况 | 第40-41页 |
| ·平板集落形成试验 | 第41页 |
| ·AnnexinV-R-PE/7-AAD 法检测细胞早期凋亡 | 第41页 |
| ·细胞侵袭实验 | 第41-42页 |
| ·统计学处理 | 第42页 |
| ·结果 | 第42-44页 |
| ·细胞增殖的变化 | 第42页 |
| ·细胞凋亡率的分析 | 第42-43页 |
| ·转染前后MCF-7 各组细胞的体外侵袭能力分析 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| 4 沉默SMYD3 基因对MCF-7 细胞wnt10b、c-myc 表达的影响 | 第46-52页 |
| ·材料与试剂 | 第46页 |
| ·细胞株 | 第46页 |
| ·试剂 | 第46页 |
| ·常用溶液的配制 | 第46页 |
| ·主要仪器 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-48页 |
| ·RNA 提取 | 第46-47页 |
| ·RNA 逆转录成cDNA | 第47页 |
| ·PCR | 第47-48页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第48页 |
| ·统计学处理 | 第48页 |
| ·结果 | 第48-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 5 参考文献 | 第52-56页 |
| 附录A 常用溶液及缓冲液配方 | 第56-60页 |
| 附录B 实验设备型号 | 第60-61页 |
| 6 在学研究成果 | 第61-62页 |
| 7 致谢 | 第62-63页 |
