| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 缩写名词表 | 第13-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-32页 |
| ·植物体细胞胚胎发生研究概况 | 第14-19页 |
| ·影响植物体细胞胚胎发生的因素 | 第14-16页 |
| ·影响植物体细胞胚胎发生的关键基因 | 第16-19页 |
| ·WUSCHEL(WUS)基因 | 第16页 |
| ·SERK基因 | 第16-17页 |
| ·LEAFY COTYLEDON(LEC)基因 | 第17-18页 |
| ·late embryo-abundant(LEA)基因 | 第18-19页 |
| ·植物体细胞胚胎发育的机制 | 第19页 |
| ·HmgB基因的功能研究 | 第19-25页 |
| ·HmgB家族的结构特点和命名方式 | 第19-21页 |
| ·HmgB基因在酵母中的研究 | 第21页 |
| ·HmgB在植物中的研究 | 第21-22页 |
| ·HmgB在动物中的研究 | 第22-25页 |
| ·细胞外HmgB蛋白在疾病研究中的作用 | 第22-24页 |
| ·HmgB蛋白在生长发育中的作用 | 第24-25页 |
| ·β-catenin的功能研究 | 第25-30页 |
| ·β-catenin的结构特点 | 第25-26页 |
| ·β-catenin的功能 | 第26-30页 |
| ·β-catenin通过Wnt途径决定细胞的命运 | 第26-28页 |
| ·β-catenin促进细胞的增殖 | 第28-29页 |
| ·β-catenin在疾病和癌症中的研究 | 第29-30页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第30-32页 |
| 2 陆地棉HmgB家族基因的克降和鉴定 | 第32-46页 |
| ·引言 | 第32页 |
| ·材料与方法 | 第32-39页 |
| ·实验材料,主要试剂和仪器 | 第32-33页 |
| ·实验材料 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-39页 |
| ·RNA的抽提 | 第33页 |
| ·mRNA的分离和RACE模板的制备 | 第33-34页 |
| ·HmgB基因的全长克隆 | 第34-35页 |
| ·陆地棉HmgB家族基因的表达模式分析 | 第35-37页 |
| ·陆地棉HmgB蛋白序列的进化树分析 | 第37-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-44页 |
| ·RNA的提取、mRNA的分离 | 第39页 |
| ·RACE扩增与全长序列的获得 | 第39-40页 |
| ·GhHmgB家族基因在不同组织内的表达模式 | 第40-42页 |
| ·GhHmgB家族基因的生物信息学分析 | 第42-44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| ·GhHmgB家族成员RACE克隆的几点经验 | 第44页 |
| ·GhHmgB家族成员的结构特点 | 第44-46页 |
| 3 RNAi载体构建,转基因材料的鉴定与表型观察 | 第46-62页 |
| ·材料与方法 | 第46-54页 |
| ·棉花材料 | 第46页 |
| ·主要菌株和试剂 | 第46-50页 |
| ·所用载体菌株 | 第46页 |
| ·相关酶类和试剂 | 第46页 |
| ·转基因相关培养基 | 第46页 |
| ·DNA抽提相关溶液 | 第46-47页 |
| ·Western相关试剂 | 第47-50页 |
| ·RNAi载体的构建和遗传转化 | 第50页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第50-51页 |
| ·下胚轴、胚性愈伤的诱导 | 第50-51页 |
| ·农杆菌转化 | 第51页 |
| ·转基因材料的获得 | 第51页 |
| ·转基因材料的鉴定 | 第51-54页 |
| ·转基因材料DNA水平检测 | 第51-52页 |
| ·转基因材料RNA水平检测 | 第52页 |
| ·转基因材料蛋白质水平检测(Western blotting) | 第52-53页 |
| ·胚性愈伤均一化的悬浮培养与表型观察 | 第53-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-59页 |
| ·酶切检测RNAi载体pHellsgate 4的构建 | 第54页 |
| ·RNAi下胚轴的分化和脱分化情况 | 第54-55页 |
| ·RNAi胚性愈伤的鉴定和表型观察 | 第55-59页 |
| ·DNA水平的NPTⅡ检测 | 第56页 |
| ·RNA水平的检测 | 第56-58页 |
| ·蛋白质水平的Western检测 | 第58页 |
| ·转基因胚性愈伤的同步化培养和表型鉴定 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-62页 |
| ·提高BP反应效率的几点经验 | 第59-60页 |
| ·适合棉花的蛋白质粗提方法以及Western反应 | 第60-61页 |
| ·胚性愈伤转化的几点问题 | 第61页 |
| ·本研究中RNAi材料的表型 | 第61-62页 |
| 4. Solexa sequencing和相关功能的验证 | 第62-85页 |
| ·引言 | 第62-63页 |
| ·材料和方法 | 第63-67页 |
| ·实验材料 | 第63页 |
| ·相关试剂 | 第63-64页 |
| ·细胞增殖相关试剂 | 第63页 |
| ·分离原生质体相关溶液 | 第63-64页 |
| ·实验方法 | 第64-67页 |
| ·Solexa sequencing | 第64-65页 |
| ·Solexa Sequencing数据分析 | 第65-66页 |
| ·细胞增殖测定 | 第66页 |
| ·MTS assay | 第66页 |
| ·细胞周期分析 | 第66页 |
| ·透射电镜扫描 | 第66-67页 |
| ·结果和分析 | 第67-79页 |
| ·RNAi和对照间差异表达的基因 | 第67页 |
| ·差异基因的GO和KEGG分析 | 第67-69页 |
| ·β-catenin相关基因的Real-time PCR验证 | 第69-75页 |
| ·细胞增殖检测 | 第75-76页 |
| ·细胞悬浮培养10天后的增殖率统计 | 第75页 |
| ·MTS酶活检测 | 第75-76页 |
| ·细胞周期分析 | 第76-78页 |
| ·透射电镜扫描 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79-85页 |
| ·β-catenin相关的代谢路径调节棉花体细胞胚胎的发育 | 第79-83页 |
| ·β-catenin促进细胞的增殖 | 第79-80页 |
| ·一条和Wnt/β-catenin类似的代谢路径决定细胞的命运 | 第80-82页 |
| ·GhHmgB3参与β-catenin相关路径的方式 | 第82-83页 |
| ·GhHmgB3是细胞的正常生长的重要指标 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-98页 |
| 附录 | 第98-138页 |
| 在读期间发表的论文 | 第138-139页 |
| 致谢 | 第139页 |
