| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 1 引言 | 第12-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-34页 |
| ·试验材料 | 第16-18页 |
| ·菌株和质粒 | 第16页 |
| ·主要试剂 | 第16页 |
| ·供试培养基及试剂配制 | 第16-17页 |
| ·主要仪器 | 第17-18页 |
| ·特异性抑制剂对玉米大斑病菌生长发育及致病性的影响 | 第18-19页 |
| ·试验方法 | 第18页 |
| ·检测方法 | 第18页 |
| ·抑制剂对玉米大斑病菌致病性的影响 | 第18-19页 |
| ·玉米大斑病菌STAC 基因的克隆 | 第19-23页 |
| ·引物设计 | 第19页 |
| ·病菌基因组DNA 及总RNA 提取 | 第19-20页 |
| ·反转录体系及第一链cDNA 的合成 | 第20页 |
| ·玉米大斑病菌STAC 基因DNA 同源片段的获得 | 第20-21页 |
| ·DNA 片段的纯化 | 第21页 |
| ·PCR 产物与pMD19-T 载体的连接 | 第21-22页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第22页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第22页 |
| ·PCR 验证阳性克隆 | 第22-23页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 | 第23页 |
| ·质粒样本测序与同源性分析 | 第23页 |
| ·基因侧翼序列的获得 | 第23-25页 |
| ·模板DNA 的制备和引物的设计 | 第23-24页 |
| ·Genome walking PCR 扩增 | 第24-25页 |
| ·基因的拼结及同源性分析 | 第25页 |
| ·基因的拷贝数分析 | 第25-26页 |
| ·探针制备 | 第25页 |
| ·酶切 | 第25页 |
| ·电转移 | 第25-26页 |
| ·Southern Blotting | 第26页 |
| ·免疫检测 | 第26页 |
| ·STAC 基因在不同碳源培养条件下表达规律测定 | 第26-27页 |
| ·STAC 基因敲除转化子的获得 | 第27-32页 |
| ·STAC 同源重组载体的构建 | 第27-30页 |
| ·重组基因片段的制备 | 第30页 |
| ·原生质体的制备 | 第30页 |
| ·原生质体的纯化 | 第30页 |
| ·原生质体转化 | 第30-31页 |
| ·原生质体的再生 | 第31页 |
| ·转化子的筛选 | 第31页 |
| ·转化子基因组DNA 的提取 | 第31页 |
| ·转化子验证及分析 | 第31-32页 |
| ·玉米大斑病菌 STAC 基因敲除突变体 Δstac 的生物学性状分析 | 第32-34页 |
| ·Δstac 突变菌株菌落形态的观察、菌丝形态的显微观察和菌落生长速度测定 | 第32页 |
| ·Δstac 突变菌株产毒力的测定 | 第32-33页 |
| ·Δstac 突变菌株致病力测定 | 第33页 |
| ·Δstac 突变体菌株的漆酶活性检测 | 第33页 |
| ·Δstac 突变菌株高渗条件下菌落生长及菌丝形态的显微观察 | 第33-34页 |
| 3 结果和分析 | 第34-56页 |
| ·玉米大斑病菌 cAMP 腺苷酸环化酶基因的特异性抑制剂分析 | 第34-36页 |
| ·抑制剂对玉米大斑病孢子萌发的影响 | 第34页 |
| ·抑制剂对玉米大斑病菌附着胞的影响 | 第34-35页 |
| ·抑制剂对玉米大斑病菌致病力的影响 | 第35-36页 |
| ·STAC 基因同源片断的获得 | 第36-38页 |
| ·基因组DNA 和总RNA 的提取 | 第36页 |
| ·玉米大斑病菌STAC 基因DNA 同源片段的扩增 | 第36-38页 |
| ·STAC 基因同源片断的延伸 | 第38-41页 |
| ·STAC 基因生物信息学分析 | 第41-42页 |
| ·STAC 的同源性分析 | 第41-42页 |
| ·玉米大斑病菌STAC 蛋白保守结构域 | 第42页 |
| ·STAC 基因拷贝数分析 | 第42-43页 |
| ·STAC 基因探针的制备 | 第42-43页 |
| ·Southern 杂交分析 | 第43页 |
| ·STAC 基因在不同碳源培养条件下的表达规律 | 第43-44页 |
| ·STAC 的同源重组 | 第44-47页 |
| ·STAC 基因敲除载体的构建 | 第44-46页 |
| ·重组DNA 片段的PCR 扩增 | 第46页 |
| ·STAC 基因同源重组载体转化 | 第46-47页 |
| ·STAC 基因同源重组转化子筛选与鉴定 | 第47-48页 |
| ·STAC 基因的功能分析 | 第48-56页 |
| ·Δstac 突变菌株性状观察 | 第48-50页 |
| ·Δstac 突变菌株的生长速度确定 | 第50-51页 |
| ·Δstac 突变菌株粗毒素生物学活性的测定 | 第51页 |
| ·Δstac 突变菌株的致病力 | 第51-52页 |
| ·Δstac 突变体菌株高渗胁迫下的生长形态 | 第52-55页 |
| ·Δstac 突变菌株的漆酶活性 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-59页 |
| ·基因敲除突变体的研究 | 第56页 |
| ·腺苷酸环化酶特异性抑制剂的研究 | 第56-57页 |
| ·STAC 基因在不同碳源培养条件下的表达 | 第57-59页 |
| 5 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
