| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-17页 |
| 目录 | 第17-21页 |
| 英文缩略词 | 第21-22页 |
| 前言 | 第22-25页 |
| 第一章 人睾丸基因TDRG1在不同物种间同源序列的分析 | 第25-36页 |
| 1 材料和方法 | 第25-31页 |
| ·材料 | 第25页 |
| ·试剂 | 第25-26页 |
| ·主要仪器 | 第26-27页 |
| ·生物信息学分析 | 第27页 |
| ·人睾丸组织总RNA的抽提 | 第27-28页 |
| ·RNA样品浓度的测定与质量鉴定 | 第28页 |
| ·RNA逆转录合成cDNA | 第28-29页 |
| ·PCR扩增TDRG1序列 | 第29-30页 |
| ·免疫组化染色 | 第30-31页 |
| 2 结果 | 第31-34页 |
| ·生物信息学分析TDRG1在小鼠和大鼠中的同源序列 | 第31页 |
| ·生物信息学分析TDRG1在黑猩猩中的同源序列 | 第31-32页 |
| ·RT-PCR钩取TDRG1在小鼠、大鼠中的同源序列 | 第32-33页 |
| ·蛋白质水平验证 | 第33-34页 |
| 3 讨论 | 第34-36页 |
| 第二章 人睾丸特异基因TDRG1单克隆抗体的制备及鉴定 | 第36-58页 |
| 1 材料和方法 | 第36-46页 |
| ·材料 | 第36页 |
| ·试剂 | 第36-37页 |
| ·主要仪器 | 第37-38页 |
| ·TDRG1基因编码序列的扩增 | 第38-40页 |
| ·TDRG1重组质粒的构建及鉴定 | 第40-42页 |
| ·TDRG1重组蛋白的表达与纯化 | 第42-43页 |
| ·小鼠免疫 | 第43页 |
| ·细胞融合及杂交瘤细胞筛选 | 第43-44页 |
| ·制备腹水 | 第44页 |
| ·腹水效价及mAb亚类的鉴定 | 第44-45页 |
| ·mAb特异性检测 | 第45-46页 |
| 2 结果 | 第46-55页 |
| ·RT-PCR扩增TDRG1基因编码序列 | 第46-47页 |
| ·原核表达质粒的酶切鉴定及测序 | 第47-50页 |
| ·TDRG1重组蛋白的表达和纯化 | 第50页 |
| ·亚克隆筛选及杂交瘤细胞株的建立 | 第50-51页 |
| ·腹水效价测定及亚类鉴定 | 第51-52页 |
| ·Western Blot鉴定单克隆抗体特异性 | 第52-53页 |
| ·免疫组化染色鉴定单克隆抗体的特异性 | 第53-55页 |
| 3 讨论 | 第55-58页 |
| 第三章 TDRG1蛋白在多组织中的表达分析及功能初探 | 第58-79页 |
| 1 材料和方法 | 第58-64页 |
| ·材料和试剂 | 第58-59页 |
| ·主要仪器 | 第59-60页 |
| ·免疫组化染色检测TDRG1蛋白 | 第60页 |
| ·Realtime PCR检测TDRG1基因的表达水平 | 第60-62页 |
| ·Western Blot的实验步骤 | 第62-63页 |
| ·图像定量分析 | 第63页 |
| ·统计分析 | 第63-64页 |
| 2 结果 | 第64-76页 |
| ·蛋白质水平验证TDRG1基因在睾丸组织中的表达 | 第64-66页 |
| ·TDRG1蛋白在人体其他组织中无表达 | 第66-72页 |
| ·Real-time PCR检测TDRG1基因在不同发育阶段睾丸组织中的表达 | 第72-74页 |
| ·免疫组化染色分析TDRG1蛋白在不同发育阶段睾丸组织中的表达 | 第74-76页 |
| 3 讨论 | 第76-79页 |
| 第四章 TDRG1蛋白在睾丸肿瘤发生中的作用 | 第79-97页 |
| 1 材料和方法 | 第79-86页 |
| ·材料和试剂 | 第79-80页 |
| ·主要仪器 | 第80页 |
| ·组织芯片 | 第80-84页 |
| ·免疫组化染色法 | 第84页 |
| ·免疫组化结果判断 | 第84-86页 |
| ·图像定量分析 | 第86页 |
| ·统计分析 | 第86页 |
| 2 结果 | 第86-93页 |
| ·TDRG1蛋白在精原细胞瘤和畸胎瘤中的表达降低 | 第86-93页 |
| 3 讨论 | 第93-97页 |
| 第五章 人睾丸基因TDRG1重组真核载体的构建及其表达 | 第97-110页 |
| 1 材料和方法 | 第97-104页 |
| ·材料 | 第97页 |
| ·试剂 | 第97-98页 |
| ·主要仪器 | 第98-99页 |
| ·真核表达载体构建设计 | 第99-100页 |
| ·RT-PCR扩增TDRG1的编码区序列 | 第100-101页 |
| ·TDRG1重组质粒的构建及鉴定 | 第101-102页 |
| ·转染实验 | 第102-103页 |
| ·Western Blot操作规程 | 第103页 |
| ·免疫荧光染色 | 第103-104页 |
| ·脂质体介导的pYD5-TDRG1转染及观察荧光表达 | 第104页 |
| 2 结果 | 第104-108页 |
| ·靶基因扩增结果 | 第104-105页 |
| ·pYD5-TDRG1重组质粒的酶切鉴定 | 第105页 |
| ·重组质粒转染293细胞后表达的观察 | 第105-106页 |
| ·Western blot分析 | 第106-108页 |
| 3 讨论 | 第108-110页 |
| 总结 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-122页 |
| 综述 | 第122-139页 |
| 参考文献 | 第131-139页 |
| 附录 | 第139-140页 |
| 致谢 | 第140-141页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第141-142页 |
