| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略语表 | 第13-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-21页 |
| ·双砷染料-四半胱氨酸系统简介 | 第15-18页 |
| ·TC标签的应用 | 第18页 |
| ·TC标签与GFP标签比较 | 第18-19页 |
| ·其它化学标签 | 第19-20页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 大肠杆菌烯酰ACP还原酶的标记及分析 | 第21-47页 |
| ·前言 | 第21-22页 |
| ·材料与方法 | 第22-31页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第22-23页 |
| ·培养基 | 第23页 |
| ·分子克隆方法 | 第23-27页 |
| ·质粒抽提 | 第23-24页 |
| ·总DNA抽提 | 第24-25页 |
| ·目的片段的PCR扩增 | 第25页 |
| ·PCR纯化以及切胶回收 | 第25页 |
| ·酶切 | 第25页 |
| ·连接反应 | 第25-26页 |
| ·转化感受态细胞 | 第26页 |
| ·转化子验证 | 第26页 |
| ·序列测定与比对 | 第26页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第26-27页 |
| ·载体构建 | 第27-28页 |
| ·pB-lumio的构建 | 第27页 |
| ·pB-lu-fabI的构建 | 第27页 |
| ·pET-Nt-fabI的构建 | 第27页 |
| ·pET-Wt-fabI的构建 | 第27页 |
| ·pET-Ct-fabI的构建 | 第27-28页 |
| ·pET-Bt-fabI的构建 | 第28页 |
| ·pET-Gt-fabI的构建 | 第28页 |
| ·菌种培养与蛋白纯化 | 第28-29页 |
| ·菌种培养 | 第28页 |
| ·Ni-NTA亲和纯化 | 第28页 |
| ·蛋白含量测定 | 第28页 |
| ·常规SDS-PAGE分析 | 第28-29页 |
| ·酶活测定方法 | 第29页 |
| ·体外染色 | 第29页 |
| ·体内染色 | 第29页 |
| ·CZE分析 | 第29-30页 |
| ·HPLC分析 | 第30页 |
| ·SPF分析 | 第30页 |
| ·微波处理 | 第30页 |
| ·超声波处理 | 第30页 |
| ·共聚焦显微镜分析 | 第30页 |
| ·SDS-PAGE在胶分析 | 第30-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-43页 |
| ·实验中用到的菌株和质粒 | 第31-32页 |
| ·最适酶量与最适底物浓度的确定 | 第32-33页 |
| ·染色前标签对酶活力的影响 | 第33-34页 |
| ·NADH标准曲线的制作 | 第33页 |
| ·双倒数作图法求取K_m和V_m | 第33-34页 |
| ·染色后对酶活力的影响 | 第34-36页 |
| ·染料与标签结合稳定性分析 | 第36-37页 |
| ·高场强对染料与标签结合稳定性的影响 | 第36页 |
| ·加热对染料与标签结合稳定性的影响 | 第36页 |
| ·超声处理对染料与标签结合稳定性的影响 | 第36页 |
| ·微波对染料与标签结合稳定性的影响 | 第36页 |
| ·高压对染料与标签结合稳定性的影响 | 第36-37页 |
| ·定量分析 | 第37-42页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第37-39页 |
| ·CZE分析 | 第39-40页 |
| ·SPF分析 | 第40-42页 |
| ·活细胞显影 | 第42-43页 |
| ·体内染色后的CZE分析 | 第43页 |
| ·讨论 | 第43-47页 |
| ·TC标签与EGFP标签的比较分析 | 第43-45页 |
| ·CZE分析的条件优化 | 第45页 |
| ·染料与TC标签结合稳定性分析 | 第45-46页 |
| ·TC与HPLC连用开拓了应用新领域 | 第46-47页 |
| 第三章 E.coli超量表达holo-ACP的定量分析 | 第47-58页 |
| ·前言 | 第47页 |
| ·材料与方法 | 第47-50页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第47页 |
| ·培养基配方 | 第47页 |
| ·分子克隆方法 | 第47-48页 |
| ·载体构建 | 第48-49页 |
| ·pB-lu-ACP构建过程 | 第48页 |
| ·pET-AcpS构建过程 | 第48页 |
| ·pB-lu-ACP-AcpS构建过程 | 第48页 |
| ·pB-lu-his构建过程 | 第48页 |
| ·pB-lu-ACP-his构建过程 | 第48页 |
| ·pGEX-6p-ACP构建过程 | 第48-49页 |
| ·pGEX-6p-ACP-AcpS构建过程 | 第49页 |
| ·菌种培养与蛋白纯化 | 第49-50页 |
| ·菌种培养 | 第49页 |
| ·DE-23阴离子交换树脂纯化 | 第49-50页 |
| ·AasS的镍柱纯化 | 第50页 |
| ·蛋白含量测定 | 第50页 |
| ·Native-PAGE分析 | 第50页 |
| ·体外延伸反应 | 第50页 |
| ·体外染色 | 第50页 |
| ·体内染色 | 第50页 |
| ·ACP的MEKC分析 | 第50页 |
| ·结果与分析 | 第50-56页 |
| ·实验中用到的菌株 | 第50-51页 |
| ·诱导表达后的Native-PAGE分析 | 第51-52页 |
| ·体外染色后的Native-PAGE分析 | 第52-53页 |
| ·体外反应后的Native-PAGE分析 | 第53-54页 |
| ·体内染色后的共聚焦显微镜检测 | 第54-55页 |
| ·体外染色后的MEKC分析 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| ·TC标签对蛋白纯化带来的困难 | 第56页 |
| ·TC标记的背景来源分析以及应对策略 | 第56-58页 |
| 第四章 结论与展望 | 第58-60页 |
| ·结论 | 第58-59页 |
| ·展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 附录 | 第72页 |
| 附图1:载体pB-lu-fabI的构建过程图 | 第72页 |
| 附图2:载体pET-Nt-fabI的构建过程图 | 第72-73页 |
| 附图3:载体pET-Wt-fabI的构建过程图 | 第73-74页 |
| 附图4:载体pET-Ct-fabI的构建过程图 | 第74-75页 |
| 附图5:载体pET-Bt-fabI的构建过程图 | 第75页 |
| 附图6:载体pET-Gt-fabI的构建过程图 | 第75-76页 |
| 附图7:载体pB-lu-ACP的构建过程图 | 第76页 |
| 附图8:载体pET-AcpS的构建过程图 | 第76-77页 |
| 附图9:载体pB-lu-ACP-AcpS的构建过程图 | 第77-78页 |
| 附图10:载体pB-lu-his的构建过程图 | 第78-79页 |
| 附图11:载体pB-lu-ACP-his的构建过程图 | 第79页 |
| 附图12:载体pGEX-6p-ACP的构建过程图 | 第79-80页 |
| 附图13:载体pGEX-6p-ACP-AcpS的构建过程图 | 第80页 |
