| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 第1章 文献综述 | 第9-19页 |
| ·t-PA 的研究进展 | 第9-11页 |
| ·t-PA 发展简史 | 第9-10页 |
| ·t-PA 的生物学活性 | 第10-11页 |
| ·产蛋鸡卵黄中营养物的转运与沉积的研究 | 第11-13页 |
| ·VLDLy 组装过程 | 第12页 |
| ·apo-B100 对VLDLy 组装过程的影响 | 第12-13页 |
| ·转基因家禽生物反应器的研究进展 | 第13-16页 |
| ·转基因动物作为生物反应器 | 第13页 |
| ·家禽作为生物反应器的独特优势 | 第13-14页 |
| ·家禽转基因技术面临的困境 | 第14-16页 |
| ·利用转基因动物生物反应器生产t-PA | 第16-17页 |
| ·t-PA 在原核和真核细胞中的表达 | 第16页 |
| ·t-PA 在转基因动物乳腺中的表达 | 第16-17页 |
| ·t-PA 的纯化和检测 | 第17页 |
| ·问题与展望 | 第17-19页 |
| 第2章 pCDNA_3-apo-△tPA 特异性表达载体的构建 | 第19-32页 |
| ·材料与方法 | 第19-21页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·主要溶液及配制方法 | 第20-21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21页 |
| ·DNA 分析软件 | 第21页 |
| ·试验方法 | 第21-28页 |
| ·试验设计 | 第21-23页 |
| ·引物设计与合成 | 第23页 |
| ·对apo-B100 和△t-PA 目的基因分别进行扩增、回收纯化、克隆 | 第23-26页 |
| ·连接产物的转化、质粒提取、酶切鉴定 | 第26-28页 |
| ·Apo-△tPA 基因融合与pCDNA_3-apo-△tPA 载体构建 | 第28页 |
| ·结果与分析 | 第28-30页 |
| ·目的基因的克隆和重组质粒的酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·pMD18-T-apo-△tPA 和pMD18-T-△tPA 质粒的酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·pMD18-T-apo-△tPA 和pMD18-T-△tPA 质粒的酶切鉴定 | 第30页 |
| ·讨论 | 第30-32页 |
| 第3章 pCDNA_3-apo-△tPA 表达载体在鸡胚肝细胞的表达检测 | 第32-42页 |
| ·材料与试剂 | 第32-35页 |
| ·材料 | 第32-33页 |
| ·主要试剂 | 第33-35页 |
| ·实验方法 | 第35-37页 |
| ·鸡胚肝细胞的分离和体外培养 | 第35页 |
| ·pCDNA_3 -apo-△tPA 真核表达载体转染鸡胚肝细胞 | 第35-36页 |
| ·鸡胚肝细胞中表达产物的检测 | 第36-37页 |
| ·结果分析 | 第37-39页 |
| ·鸡胚肝细胞的体外培养 | 第37-38页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 检测 | 第38-39页 |
| ·表达产物的ELISA 检测 | 第39页 |
| ·达产物的活性检表测结果 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-42页 |
| 第4章 pCDNA_3-apo-△tPA 表达载体在鸡体及卵黄中的表达检测 | 第42-57页 |
| ·材料与试剂 | 第43-44页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·主要器械及仪器 | 第43页 |
| ·主要溶液及配制方法 | 第43-44页 |
| ·试验方法 | 第44-49页 |
| ·无内毒素质粒DNA 纯化试剂盒提纯pCDNA_3-apo-△tPA 质粒DNA | 第44-45页 |
| ·采用脂质体介导的方法，将pCDNA_3-apo-△tPA 质粒翅下静脉注入鸡体 | 第45页 |
| ·融合蛋白在鸡蛋中的定性表达检测 | 第45-47页 |
| ·融合蛋白在鸡蛋中的定量表达检测 | 第47页 |
| ·融合蛋白在卵黄中的活性表达检测 | 第47-48页 |
| ·融合蛋白在鸡体内不同组织的表达检测 | 第48-49页 |
| ·结果分析 | 第49-54页 |
| ·卵黄中融合蛋白的SDS 电泳及其western blotting 检测 | 第49-50页 |
| ·Apo -△tPA 融合蛋白在卵黄表达含量的检测 | 第50-52页 |
| ·融合蛋白在卵黄中的活性表达检测 | 第52-54页 |
| ·融合蛋白在鸡体组织中的定位检测 | 第54页 |
| ·讨论 | 第54-57页 |
| 第5章 结论 | 第57-58页 |
| 1. 构建了pCDNA_3-apo-△tPA 表达载体 | 第57页 |
| 2. pCDNA_3-apo-△tPA 表达载体在体外细胞能有效表达 | 第57页 |
| 3. pCDNA_3-apo-△tPA 表达载体在鸡体内表达并能够在卵黄中沉积 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第65页 |
