| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 目录 | 第12-18页 |
| 图目录 | 第18-20页 |
| 表目录 | 第20-21页 |
| 缩略语表 | 第21-23页 |
| 1 文献综述 | 第23-49页 |
| ·牙周病 | 第23-25页 |
| ·口腔细菌 | 第25-30页 |
| ·口腔微生物环境 | 第25-26页 |
| ·口腔细菌种类及其生境 | 第26-27页 |
| ·牙菌斑 | 第27-28页 |
| ·牙周病原菌 | 第28-29页 |
| ·细菌分泌的致病相关因子 | 第29-30页 |
| ·口腔细菌与宿主的相互关系 | 第30-35页 |
| ·动态平衡关系 | 第30-32页 |
| ·牙周病原菌侵入宿主的机制 | 第32-34页 |
| ·细菌外膜蛋白 | 第34-35页 |
| ·口腔细菌的粘附机制 | 第35-45页 |
| ·研究口腔细菌粘附机制的有利条件 | 第35-36页 |
| ·口腔细菌粘附机制的研究进展 | 第36-37页 |
| ·粘附机制概述 | 第37-39页 |
| ·细菌组成变化 | 第39-40页 |
| ·龈下细菌及细菌共聚 | 第40-41页 |
| ·唾液蛋白和膜上受体 | 第41-42页 |
| ·粘附素 | 第42-45页 |
| ·中间普氏菌 | 第45-49页 |
| 2 中间普氏菌中一个能结合纤维蛋白原的蛋白AdpD的鉴定 | 第49-76页 |
| ·材料与方法 | 第49-64页 |
| ·试剂和仪器 | 第49-50页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第50页 |
| ·真核细胞的培养 | 第50-51页 |
| ·细菌总DNA提取 | 第51-52页 |
| ·细菌外膜蛋白基因的克隆 | 第52-53页 |
| ·基因原核表达载体的构建 | 第53-55页 |
| ·蛋白质的原核表达及表达产物的纯化 | 第55-57页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳 | 第57页 |
| ·Western印迹分析 | 第57-58页 |
| ·蛋白定量 | 第58-59页 |
| ·多抗血清的制备及纯化 | 第59-60页 |
| ·酶联免疫吸附法 | 第60-62页 |
| ·HisDetector~(TM) Nickel-HRP检测His标签的融合蛋白 | 第62页 |
| ·细菌外膜蛋白制备 | 第62-63页 |
| ·检测真核细胞中的纤维蛋白原 | 第63页 |
| ·细菌与上皮细胞粘附实验 | 第63-64页 |
| ·结果分析 | 第64-73页 |
| ·AdpD是一个富亮氨酸的BspA类蛋白 | 第64-65页 |
| ·adpD基因的克隆和原核表达载体构建 | 第65-66页 |
| ·利用pET30a(+)载体在大肠杆菌中表达His融合蛋白 | 第66-67页 |
| ·融合蛋白rAdpD的纯化 | 第67-68页 |
| ·针对AdpD蛋白的特异性抗体的制备 | 第68-69页 |
| ·AdpD是一个纤维蛋白原结合蛋白 | 第69页 |
| ·AdpD是一个外膜蛋白 | 第69-71页 |
| ·纤维蛋白原在宿主细胞中的分布 | 第71-72页 |
| ·AdpD对中间普氏菌粘附口腔上皮细胞的促进作用 | 第72-73页 |
| ·讨论 | 第73-76页 |
| 3 中间普氏菌中一个能结合胶原蛋白的蛋白AdpE的鉴定 | 第76-87页 |
| ·材料与方法 | 第76-78页 |
| ·实验材料 | 第76页 |
| ·细菌外膜蛋白基因的克隆 | 第76-77页 |
| ·原核表达载体的构建和蛋白原核表达 | 第77页 |
| ·多抗血清的制备及纯化 | 第77页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳和Western印迹分析 | 第77页 |
| ·HisDetector~(TM) Nickel-HRP检测His标签的融合蛋白 | 第77-78页 |
| ·细菌与上皮细胞粘附实验 | 第78页 |
| ·结果分析 | 第78-85页 |
| ·AdpE是一个富亮氨酸的BspA类蛋白 | 第78-79页 |
| ·AdpE的原核表达及纯化 | 第79-82页 |
| ·针对AdpE蛋白的特异性抗体的制备 | 第82页 |
| ·AdpE是一个胶原蛋白结合蛋白 | 第82-83页 |
| ·AdpE是一个细菌外膜蛋白 | 第83-84页 |
| ·AdpE对中间普氏菌粘附口腔上皮细胞的促进作用 | 第84-85页 |
| ·讨论 | 第85-87页 |
| 4 应用qRT-PCR阵列对中间普氏菌与HeLa细胞相互作用后粘附素基因表达水平的研究 | 第87-107页 |
| ·材料与方法 | 第88-94页 |
| ·试剂和仪器 | 第88-89页 |
| ·菌株和真核细胞培养 | 第89页 |
| ·侵入实验及样品制备 | 第89-90页 |
| ·RNA的提取 | 第90页 |
| ·cDNA的合成 | 第90-91页 |
| ·qRT-PCR | 第91-93页 |
| ·数据分析方法 | 第93页 |
| ·差异表达基因的克隆和蛋白特性分析 | 第93-94页 |
| ·结果分析 | 第94-105页 |
| ·实验体系的验证 | 第94-95页 |
| ·PCR扩增效率和引物特异性的分析 | 第95-96页 |
| ·中间普氏菌与HeLa细胞相互作用后的基因表达 | 第96-101页 |
| ·中间普氏菌生长在条件培养液中的基因表达 | 第101-103页 |
| ·基因PIO137生物学功能鉴定 | 第103-105页 |
| ·讨论 | 第105-107页 |
| 5 中间普氏菌针对HN4和HeLa细胞分泌因子的蛋白表达差异研究 | 第107-132页 |
| ·材料与方法 | 第109-119页 |
| ·试剂和仪器 | 第109页 |
| ·在细胞条件培养液中培养细菌 | 第109-110页 |
| ·细菌外膜蛋白的荧光染色和样品制备 | 第110-111页 |
| ·细菌全蛋白的提取和制备 | 第111-112页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第112-113页 |
| ·等电聚焦 | 第113-114页 |
| ·胶条平衡 | 第114-115页 |
| ·第二维SDS-PAGE电泳 | 第115-116页 |
| ·凝胶染色及图像分析 | 第116-117页 |
| ·液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析 | 第117-118页 |
| ·qRT-PCR检测差异蛋白对应的转录水平 | 第118-119页 |
| ·结果分析 | 第119-128页 |
| ·中间普氏菌外膜蛋白的二维凝胶电泳图谱 | 第119-121页 |
| ·外膜蛋白质谱检测 | 第121-125页 |
| ·编码差异蛋白基因的转录水平 | 第125-126页 |
| ·中间普氏菌全蛋白的二维凝胶电泳图谱 | 第126-128页 |
| ·讨论 | 第128-132页 |
| ·二维凝胶电泳实验优化 | 第128-130页 |
| ·差异蛋白分析 | 第130-132页 |
| 6 全文小结 | 第132-135页 |
| 参考文献 | 第135-151页 |
| 附7 不同牙周健康状况者四种牙周病原菌的检测水平 | 第151-174页 |
| ·材料与方法 | 第152-159页 |
| ·技术方案 | 第152页 |
| ·实验材料和仪器 | 第152-153页 |
| ·纳入标准 | 第153页 |
| ·临床检查和牙周样品采集 | 第153-156页 |
| ·DNA提取 | 第156-157页 |
| ·实时荧光定量PCR反应 | 第157-158页 |
| ·标准定量曲线制备 | 第158-159页 |
| ·统计分析 | 第159页 |
| ·结果分析 | 第159-170页 |
| ·检测条件 | 第159-162页 |
| ·不同牙周状况者四种牙周病原菌的检出率 | 第162-163页 |
| ·在不同牙周状况者四种牙周细菌的分布数量 | 第163-167页 |
| ·细菌在唾液、龈上菌斑和龈下菌斑不同部位分布的相关性 | 第167-168页 |
| ·四种细菌之间在不同口腔部位分布的相关性 | 第168-170页 |
| ·讨论 | 第170-172页 |
| 第7章 参考文献 | 第172-174页 |
| 附表 | 第174-180页 |
| 作者简历 | 第180页 |
