| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 引言 | 第12-59页 |
| 1.1 黄瓜绿斑驳花叶病毒病研究现状 | 第12-22页 |
| 1.1.1 黄瓜绿斑驳花叶病毒基因组结构与功能 | 第12-13页 |
| 1.1.2 黄瓜绿斑驳花叶病毒的寄主范围、为害症状和地理分布 | 第13-17页 |
| 1.1.3 黄瓜绿斑驳花叶病毒的传播方式 | 第17-20页 |
| 1.1.4 黄瓜绿斑驳花叶病毒病的防治 | 第20-22页 |
| 1.2 植物miRNA研究进展 | 第22-48页 |
| 1.2.1 植物miRNA的生物学特性 | 第22-23页 |
| 1.2.2 植物miRNA的生物合成 | 第23-24页 |
| 1.2.3 植物miRNA的作用机制 | 第24页 |
| 1.2.4 植物miRNA的靶基因 | 第24-35页 |
| 1.2.5 与植物miRNA相关的常用研究技术 | 第35-41页 |
| 1.2.6 植物miRNA的功能 | 第41-47页 |
| 1.2.7 植物miRNA在寄主-病毒互作过程中的功能研究展望 | 第47-48页 |
| 1.3 人工miRNA介导的植物抗病基因工程研究进展 | 第48-53页 |
| 1.3.1 人工miRNA简介 | 第48页 |
| 1.3.2 人工miRNA的设计 | 第48-49页 |
| 1.3.3 人工miRNA前体的获得 | 第49-50页 |
| 1.3.4 人工miRNA植物表达载体的构建 | 第50-52页 |
| 1.3.5 人工miRNA在植物抗病育种上的应用 | 第52-53页 |
| 1.3.6 人工miRNA介导的抗性展望 | 第53页 |
| 1.4 本研究的主要内容及目的、意义 | 第53-59页 |
| 1.4.1 有待深入研究的科学问题和兴趣点 | 第53-57页 |
| 1.4.2 目的和意义 | 第57页 |
| 1.4.3 研究内容 | 第57-58页 |
| 1.4.4 技术路线 | 第58-59页 |
| 第二章 黄瓜绿斑驳花叶病毒胁迫下黄瓜miRNA定量表达中内参基因的筛选 | 第59-75页 |
| 2.1 材料与方法 | 第59-64页 |
| 2.1.1 材料 | 第59-60页 |
| 2.1.2 病毒接种 | 第60页 |
| 2.1.3 样品收集 | 第60页 |
| 2.1.4 供试样品的总RNA提取和cDNA合成 | 第60-61页 |
| 2.1.5 内参基因RT-qPCR引物的设计和扩增片段特异性检测 | 第61-63页 |
| 2.1.6 引物扩增效率的计算 | 第63页 |
| 2.1.7 RT-qPCR检测 | 第63页 |
| 2.1.8 内参基因表达稳定性分析 | 第63-64页 |
| 2.1.9 内参基因表达稳定性验证 | 第64页 |
| 2.2 结果与分析 | 第64-72页 |
| 2.2.1 内参基因扩增片段特异性检测 | 第64-65页 |
| 2.2.2 内参基因RT-qPCR检测结果 | 第65-67页 |
| 2.2.3 Delta-Ct分析 | 第67页 |
| 2.2.4 geNorm分析 | 第67-69页 |
| 2.2.5 NormFinder分析 | 第69-70页 |
| 2.2.6 BestKeeper分析 | 第70页 |
| 2.2.7 RefFinder分析 | 第70页 |
| 2.2.8 内参基因表达稳定性验证 | 第70-72页 |
| 2.3 小结与讨论 | 第72-75页 |
| 第三章 响应黄瓜绿斑驳花叶病毒侵染的黄瓜miRNA功能分析 | 第75-118页 |
| 3.1 材料与方法 | 第75-92页 |
| 3.1.1 材料 | 第75页 |
| 3.1.2 病毒接种 | 第75页 |
| 3.1.3 样品收集 | 第75页 |
| 3.1.4 降解组测序样品准备 | 第75-77页 |
| 3.1.5 降解组测序 | 第77页 |
| 3.1.6 黄瓜miRNA信息汇总 | 第77页 |
| 3.1.7 响应CGMMV侵染的黄瓜miRNA及其靶基因筛选 | 第77页 |
| 3.1.8 黄瓜miRNA及其靶基因调控网络构建 | 第77-78页 |
| 3.1.9 响应CGMMV侵染的黄瓜miRNA及其靶基因功能深度挖掘 | 第78页 |
| 3.1.10 供试样品总RNA提取和cDNA合成 | 第78-79页 |
| 3.1.11 响应CGMMV侵染的黄瓜miRNA及其靶基因表达特性RT-qPCR分析 | 第79-81页 |
| 3.1.12 响应CGMMV侵染的黄瓜miRNA Northern blot分析 | 第81-85页 |
| 3.1.13 5'-RLM-RACE验证黄瓜miRNA对靶基因的剪切位点 | 第85-92页 |
| 3.2 结果与分析 | 第92-116页 |
| 3.2.1 黄瓜miRNA信息汇总 | 第92页 |
| 3.2.2 降解组测序 | 第92-93页 |
| 3.2.3 黄瓜miRNA靶基因鉴定 | 第93页 |
| 3.2.4 响应CGMMV侵染的黄瓜miRNA及其靶基因筛选 | 第93-96页 |
| 3.2.5 黄瓜miRNA靶基因GO注释 | 第96-97页 |
| 3.2.6 黄瓜miRNA靶基因KEGG通路分析 | 第97-103页 |
| 3.2.7 响应CGMMV侵染的黄瓜miRNA及其靶基因深度挖掘 | 第103页 |
| 3.2.8 响应CGMMV侵染的黄瓜miRNA及其靶基因表达特征分析 | 第103-111页 |
| 3.2.9 响应CGMMV侵染的黄瓜miRNA与其靶基因表达相关性分析 | 第111页 |
| 3.2.10 降解组测序鉴定黄瓜miRNA对靶基因的剪切位点 | 第111页 |
| 3.2.11 5'-RLM-RACE验证黄瓜miRNA对靶基因的剪切位点 | 第111-113页 |
| 3.2.12 响应CGMMV侵染的黄瓜miRNA功能及其介导的调控网络 | 第113-116页 |
| 3.3 小结与讨论 | 第116-118页 |
| 第四章 人工miRNA介导的本生烟对黄瓜绿斑驳花叶病毒的抗性评价 | 第118-144页 |
| 4.1 材料与方法 | 第118-131页 |
| 4.1.1 材料 | 第118-119页 |
| 4.1.2 人工miRNA的设计和克隆 | 第119-123页 |
| 4.1.3 人工miRNA表达载体的构建 | 第123-126页 |
| 4.1.4 农杆菌介导的人工miRNA瞬时表达 | 第126-127页 |
| 4.1.5 CGMMV的挑战接种 | 第127页 |
| 4.1.6 供试样品的总RNA提取和cDNA合成 | 第127-129页 |
| 4.1.7 供试样品的Northern blot分析 | 第129-130页 |
| 4.1.8 供试样品的RT-qPCR分析 | 第130-131页 |
| 4.1.9 转基因本生烟对CGMMV的抗性评价 | 第131页 |
| 4.2 结果与分析 | 第131-141页 |
| 4.2.1 人工miRNA的重叠PCR扩增 | 第131页 |
| 4.2.2 人工miRNA二级结构的预测 | 第131-132页 |
| 4.2.3 靶向CGMMV的人工miRNA表达载体的构建和验证 | 第132-135页 |
| 4.2.4 农杆菌浸润3 dpa后人工miRNA的表达水平分析 | 第135页 |
| 4.2.5 CGMMV接种后人工miRNA的表达水平 | 第135页 |
| 4.2.6 转基因本生烟中CGMMV的RNA累积水平及其与人工miRNA表达水平的相关性分析 | 第135页 |
| 4.2.7 转基因本生烟对CGMMV的抗性及其与人工miRNA表达水平的相关性分析 | 第135-140页 |
| 4.2.8 转基因本生烟对CGMMV的抗性表型分析 | 第140-141页 |
| 4.3 小结与讨论 | 第141-144页 |
| 第五章 总结与展望 | 第144-146页 |
| 5.1 结论 | 第144页 |
| 5.2 创新点 | 第144-145页 |
| 5.2.1 黄瓜miRNA的功能分析及调控网络构建 | 第144-145页 |
| 5.2.2 人工miRNA介导的病毒抗性评价 | 第145页 |
| 5.3 展望 | 第145-146页 |
| 5.3.1 黄瓜miRNA调控机制 | 第145页 |
| 5.3.2 人工miRNA介导的抗病机制 | 第145-146页 |
| 参考文献 | 第146-167页 |
| 致谢 | 第167-169页 |
| 附录 | 第169-230页 |
| 个人简介 | 第230-234页 |
