| 致谢 | 第1-5页 |
| 中文摘要 | 第5-9页 |
| ABSTRACT | 第9-14页 |
| 目次 | 第14-19页 |
| 引言 | 第19-22页 |
| 第一部分 构建应用于生物学研究的组织工程肌腱 | 第22-29页 |
| 1、 实验材料 | 第22-23页 |
| ·材料和试剂 | 第22页 |
| ·实验仪器及材料 | 第22页 |
| ·相关溶液的配制 | 第22-23页 |
| ·L-DMEM/H-DMEM培养液 | 第22页 |
| ·PBS溶液: | 第22页 |
| ·伊红染液 | 第22页 |
| ·三色染液 | 第22-23页 |
| ·2.5%戊二醛溶液 | 第23页 |
| ·实验动物 | 第23页 |
| 2、 实验方法 | 第23-26页 |
| ·肌腱细胞培养 | 第23-24页 |
| ·原代大鼠肌腱细胞的培养 | 第23页 |
| ·传代培养 | 第23-24页 |
| ·细胞冻存 | 第24页 |
| ·细胞复苏 | 第24页 |
| ·组织工程肌腱的制备 | 第24页 |
| ·组织工程肌腱的组织学检测 | 第24-25页 |
| ·标本的制备 | 第24页 |
| ·H&E染色 | 第24-25页 |
| ·Masson三色染色法 | 第25页 |
| ·透射电镜检测组织工程肌腱的胶原纤维微观结构 | 第25-26页 |
| 3、 实验结果 | 第26-28页 |
| ·细胞培养与组织工程肌腱 | 第26-27页 |
| ·组织学观察结果 | 第27页 |
| ·透射电镜观察结果 | 第27-28页 |
| 4、 讨论 | 第28-29页 |
| 第二部分 SIRNA抑制Ⅴ型胶原表达对胶原纤维形成的影响 | 第29-45页 |
| 1、 实验材料 | 第29-30页 |
| ·材料和试剂 | 第29页 |
| ·实验仪器及材料 | 第29页 |
| ·相关溶液的配制 | 第29-30页 |
| ·L-DMEM/H-DMEM培养液 | 第29页 |
| ·PBS溶液 | 第29页 |
| ·siRNA溶液 | 第29-30页 |
| ·2.5%戊二醛溶液 | 第30页 |
| ·MTT溶液 | 第30页 |
| ·DAPI溶液 | 第30页 |
| ·实验动物 | 第30页 |
| 2、 方法 | 第30-36页 |
| ·损伤肌腱模型的制备 | 第30页 |
| ·细胞培养 | 第30页 |
| ·siRNA合成与细胞转染 | 第30-31页 |
| ·化学合成siRNA分子 | 第30页 |
| ·siRNA转染到大鼠肌腱细胞 | 第30-31页 |
| ·实时荧光定量PCR(real time PCR) | 第31-32页 |
| ·提取RNA | 第31页 |
| ·逆转录合成cDNA | 第31-32页 |
| ·Real time PCR | 第32页 |
| ·免疫荧光 | 第32-33页 |
| ·试剂准备 | 第32-33页 |
| ·操作步骤 | 第33页 |
| ·MTT检测细胞凋亡 | 第33-34页 |
| ·DAPI染色检测细胞凋亡 | 第34页 |
| ·胶原含量测定 | 第34-36页 |
| ·样本前处理 | 第34-35页 |
| ·样本检测 | 第35页 |
| ·计算公式 | 第35-36页 |
| ·透射电镜检测 | 第36页 |
| ·梯度混合培养实验 | 第36页 |
| ·统计学分析 | 第36页 |
| 3、 实验结果 | 第36-43页 |
| ·检测正常肌腱与损伤肌腱中Ⅴ型胶原的表达 | 第36-37页 |
| ·siRNA转染效率与基因抑制效率检测 | 第37-38页 |
| ·细胞增殖与凋亡检测 | 第38-39页 |
| ·组织工程肌腱胶原合成能力与胶原纤维微观结构检测 | 第39-40页 |
| ·相关基因的表达变化 | 第40-41页 |
| ·COL5A1不同表达水平对纤维微观结构的影响 | 第41-43页 |
| 4、 讨论 | 第43-45页 |
| 第三部分 反义核酸法抑制蛋白聚糖DECORIN的表达对胶原纤维形成的影响 | 第45-52页 |
| 1、 实验材料 | 第45页 |
| ·材料和试剂 | 第45页 |
| ·实验仪器及材料 | 第45页 |
| ·相关溶液的配制 | 第45页 |
| ·实验动物 | 第45页 |
| 2、 实验方法 | 第45-48页 |
| ·兔子肌腱细胞培养 | 第45页 |
| ·构建组织工程肌腱 | 第45页 |
| ·合成核酸分子与细胞转染 | 第45-46页 |
| ·合成核酸序列 | 第45-46页 |
| ·核酸转染到家兔肌腱细胞 | 第46页 |
| ·RT-PCR | 第46-47页 |
| ·提取RNA | 第46页 |
| ·逆转录合成cDNA | 第46页 |
| ·PCR | 第46-47页 |
| ·电泳 | 第47页 |
| ·免疫荧光 | 第47页 |
| ·透射电镜 | 第47页 |
| ·统计学分析 | 第47-48页 |
| 3、 实验结果 | 第48-51页 |
| ·体外组织工程肌腱转染核酸分子 | 第48页 |
| ·基因水平检测decorin抑制效率及其他相关基因变化 | 第48-49页 |
| ·蛋白水平检测蛋白聚糖decorin的抑制效率 | 第49-50页 |
| ·胶原纤维的微观结构检测 | 第50-51页 |
| 4、 讨论 | 第51-52页 |
| 第四部分 慢病毒介导的SIRNA抑制蛋白聚糖DECORIN表达对损伤肌腱修复的研究 | 第52-63页 |
| 1、 实验材料 | 第52页 |
| ·材料和试剂 | 第52页 |
| ·实验仪器及材料 | 第52页 |
| ·相关溶液的配制 | 第52页 |
| ·实验动物 | 第52页 |
| 2、 方法 | 第52-55页 |
| ·细胞培养 | 第52页 |
| ·siRNA合成与构建病毒 | 第52页 |
| ·病毒感染大鼠肌腱细胞 | 第52-53页 |
| ·real time PCR | 第53页 |
| ·免疫荧光 | 第53页 |
| ·细胞增殖与凋亡检测 | 第53页 |
| ·构建组织工程肌腱 | 第53页 |
| ·胶原含量测定 | 第53页 |
| ·动物实验 | 第53-54页 |
| ·动物分组 | 第53-54页 |
| ·肌腱缺损动物模型的建立 | 第54页 |
| ·观察指标 | 第54页 |
| ·组织学检测 | 第54页 |
| ·力学测试 | 第54页 |
| ·透射电镜 | 第54-55页 |
| ·统计学分析 | 第55页 |
| 3、 实验结果 | 第55-61页 |
| ·Decorin抑制效率检测 | 第55-56页 |
| ·干扰decorin后相关基因的表达及细胞增殖凋亡检测 | 第56-57页 |
| ·干扰decorin后组织工程肌腱胶原合成能力检测 | 第57页 |
| ·体外组织工程肌腱制作及动物模型的建立 | 第57-58页 |
| ·体内修复肌腱组织的胶原含量测定 | 第58页 |
| ·体内标本组织学结构检测 | 第58-59页 |
| ·胶原纤维微结构检测 | 第59-60页 |
| ·肌腱修复组织的力学性能 | 第60-61页 |
| 4、 讨论 | 第61-63页 |
| 第五部分 总结 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 综述 | 第69-78页 |
| 作者简历 | 第78-79页 |
