| 英文缩略词 | 第9-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第14-30页 |
| 1.1 熊蜂 | 第14-16页 |
| 1.1.1 熊蜂生物学 | 第14页 |
| 1.1.2 熊蜂地理分布 | 第14-15页 |
| 1.1.3 熊蜂授粉特性 | 第15-16页 |
| 1.1.4 国内外熊蜂授粉研究 | 第16页 |
| 1.2 熊蜂微孢子虫 | 第16-21页 |
| 1.2.1 微孢子虫的形态和分类 | 第16-18页 |
| 1.2.2 感染和传播 | 第18页 |
| 1.2.3 危害及防治 | 第18-19页 |
| 1.2.4 检测方法研究进展 | 第19-21页 |
| 1.2.4.1 常规生物学检测方法 | 第19页 |
| 1.2.4.2 染色法 | 第19-20页 |
| 1.2.4.3 免疫学方法 | 第20页 |
| 1.2.4.4 分子生物学检测 | 第20-21页 |
| 1.3 熊蜂短膜虫 | 第21-24页 |
| 1.3.1 短膜虫形态特征 | 第21-22页 |
| 1.3.2 分类与传播 | 第22-23页 |
| 1.3.3 危害及症状 | 第23页 |
| 1.3.4 检测方法研究进展 | 第23-24页 |
| 1.3.4.1 短膜虫的分离和克隆 | 第23页 |
| 1.3.4.2 常规生物学检测方法 | 第23-24页 |
| 1.3.4.3 分子检测方法 | 第24页 |
| 1.4 蜂巢小甲虫 | 第24-28页 |
| 1.4.1 蜂巢小甲虫形态特征 | 第24-25页 |
| 1.4.2 起源与传播 | 第25-26页 |
| 1.4.3 危害及防治 | 第26-27页 |
| 1.4.4 检测方法研究进展 | 第27-28页 |
| 1.4.4.1 幼虫形态学分析 | 第27-28页 |
| 1.4.4.2 寻找成虫 | 第28页 |
| 1.4.4.3 分子生物学诊断 | 第28页 |
| 1.5 本研究的背景、目的和意义 | 第28-30页 |
| 第二章 材料与方法 | 第30-38页 |
| 2.1 试验材料 | 第30-31页 |
| 2.1.1 熊蜂样本的获取 | 第30页 |
| 2.1.2 主要化学试剂与配制 | 第30页 |
| 2.1.3 主要试验仪器 | 第30-31页 |
| 2.2 试验方法 | 第31-38页 |
| 2.2.1 熊蜂肠道基因组DNA的提取与全基因合成 | 第31-32页 |
| 2.2.2 熊蜂短膜虫DNA与熊蜂微孢子虫DNA样本浓度的测定 | 第32-33页 |
| 2.2.3 三种病害特异性引物的设计与合成 | 第33页 |
| 2.2.4 PCR反应体系的建立 | 第33-36页 |
| 2.2.4.1 PCR反应体系 | 第33-34页 |
| 2.2.4.2 PCR反应参数 | 第34-35页 |
| 2.2.4.3 PCR扩增产物的电泳检测 | 第35页 |
| 2.2.4.4 PCR产物的纯化回收 | 第35-36页 |
| 2.2.4.5 PCR产物的序列测定 | 第36页 |
| 2.2.5 PCR反应条件的优化 | 第36页 |
| 2.2.5.1 最佳退火温度的选择 | 第36页 |
| 2.2.5.2 最佳引物浓度的选择 | 第36页 |
| 2.2.5.3 最佳循环次数的选择 | 第36页 |
| 2.2.6 引物特异性与灵敏度检测 | 第36-37页 |
| 2.2.6.1 特异性试验 | 第36-37页 |
| 2.2.6.2 灵敏度试验 | 第37页 |
| 2.2.6.3 重复性试验 | 第37页 |
| 2.2.7 临床样本的检测 | 第37-38页 |
| 第三章 结果与分析 | 第38-69页 |
| 3.1 熊蜂短膜虫PCR检测方法的建立与优化 | 第38-48页 |
| 3.1.1 特异性引物的设计与筛选 | 第38页 |
| 3.1.2 PCR扩增产物电泳及测序结果 | 第38-40页 |
| 3.1.3 最佳退火温度的确定 | 第40-41页 |
| 3.1.4 最佳引物浓度的确定 | 第41-42页 |
| 3.1.5 最佳循环参数的确定 | 第42-43页 |
| 3.1.6 特异性检测结果 | 第43-44页 |
| 3.1.7 灵敏度检测结果 | 第44-46页 |
| 3.1.8 重复性检测结果 | 第46-47页 |
| 3.1.9 临床样本的检测 | 第47-48页 |
| 3.2 熊蜂微孢子虫PCR检测方法的建立与优化 | 第48-59页 |
| 3.2.1 特异性引物的设计与筛选 | 第48-49页 |
| 3.2.2 PCR扩增产物电泳及测序结果 | 第49-51页 |
| 3.2.3 最佳退火温度的确定 | 第51-52页 |
| 3.2.4 最佳引物浓度的确定 | 第52-53页 |
| 3.2.5 最佳循环参数的确定 | 第53-54页 |
| 3.2.6 特异性检测结果 | 第54-55页 |
| 3.2.7 灵敏度检测结果 | 第55-57页 |
| 3.2.8 重复性检测结果 | 第57-58页 |
| 3.2.9 临床样本的检测 | 第58-59页 |
| 3.3 蜂巢小甲虫PCR检测方法的建立与优化 | 第59-69页 |
| 3.3.1 特异性引物的设计与筛选 | 第59-60页 |
| 3.3.2 PCR扩增产物的电泳与测序结果 | 第60-62页 |
| 3.3.3 最佳退火温度的确定 | 第62-63页 |
| 3.3.4 最佳引物浓度的确定 | 第63-64页 |
| 3.3.5 最佳循环参数的确定 | 第64-65页 |
| 3.3.6 特异性检测结果 | 第65-66页 |
| 3.3.7 灵敏度检测结果 | 第66-67页 |
| 3.3.8 重复性检测结果 | 第67-69页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第69-72页 |
| 4.1 结论 | 第69-70页 |
| 4.1.1 熊蜂短膜虫PCR检测技术研究结论 | 第69页 |
| 4.1.2 熊蜂微孢子虫PCR检测技术研究结论 | 第69-70页 |
| 4.1.3 蜂巢小甲虫PCR检测技术研究结论 | 第70页 |
| 4.2 讨论 | 第70-71页 |
| 4.2.1 PCR检测方法的选择 | 第70-71页 |
| 4.2.2 试验中假阴性和假阳性的避免 | 第71页 |
| 4.2.3 试验材料的获取 | 第71页 |
| 4.3 展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 致谢 | 第80页 |