| 致谢 | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-42页 |
| 1 植物的衰老 | 第12-31页 |
| ·植物衰老概述 | 第12页 |
| ·叶片衰老 | 第12-28页 |
| ·叶片衰老的过程 | 第13-16页 |
| ·叶片衰老过程中的生理生化变化 | 第16-21页 |
| ·叶片衰老的相关调控基因 | 第21页 |
| ·叶片衰老调控相关基因的分类 | 第21-25页 |
| ·叶片衰老的影响因子 | 第25-28页 |
| ·滞绿与滞绿突变体 | 第28-31页 |
| ·滞绿的概念 | 第28页 |
| ·滞绿突变体的定义及分类 | 第28-29页 |
| ·不同物种中的滞绿突变体 | 第29-31页 |
| ·滞绿突变体的意义 | 第31页 |
| 2 叶绿素降解关键调控因子NYE/SGR的研究进展 | 第31-34页 |
| ·NYE/SGR的发现 | 第32页 |
| ·NYE/SGR在其它物种中的保守性及其结构特点 | 第32-33页 |
| ·NYE/SGR的功能 | 第33-34页 |
| 3 NAC家族转录因子研究进展 | 第34-39页 |
| ·NAC转录因子结构特点及分类 | 第35-36页 |
| ·NAC转录因子在植物生长发育中的调节作用 | 第36-37页 |
| ·NAC转录因子在植物逆境和防御反应中的作用 | 第37-38页 |
| ·NAP研究进展 | 第38-39页 |
| 4 RACE概述 | 第39-40页 |
| ·3'-RACE | 第39-40页 |
| ·5'-RACE | 第40页 |
| 5 竹类植物分子生物学研究概况 | 第40-42页 |
| 第2章 材料与方法 | 第42-76页 |
| 第一节 金丝慈竹BeNYE1的分离及其功能分析 | 第42-66页 |
| 1 实验材料 | 第42-45页 |
| ·植物材料与生长条件 | 第42页 |
| ·菌株 | 第42-43页 |
| ·质粒载体 | 第43页 |
| ·培养基 | 第43-44页 |
| ·LB培养基 | 第43页 |
| ·YEB培养基 | 第43页 |
| ·植物培养基 | 第43-44页 |
| ·实验试剂 | 第44-45页 |
| 2 实验方法 | 第45-66页 |
| ·基因全长的获得方法-cDNA末端的快速扩增(RACE) | 第45页 |
| ·RNA提取、检测及定量 | 第45-46页 |
| ·RNA的提取(Trizol法) | 第45-46页 |
| ·RNA的检测 | 第46页 |
| ·RNA的定量 | 第46页 |
| ·反转录合成cDNA第一链 | 第46-47页 |
| ·RT-PCR扩增BeNYEl基因中间片断 | 第47页 |
| ·DNA片段的回收、连接、克隆和测序 | 第47-48页 |
| ·玻璃粉制作 | 第47-48页 |
| ·玻璃粉回收琼脂糖凝胶的PCR扩增产物 | 第48页 |
| ·回收片段末端加A反应 | 第48-49页 |
| ·TA连接 | 第49页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备(CaCl_2法) | 第49页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第49页 |
| ·菌液PCR鉴定及测序 | 第49-50页 |
| ·小量抽提质粒DNA | 第50页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第50-51页 |
| ·酶切片段与载体连接 | 第51页 |
| ·RACE法扩增BeNYE1基因的3'末端序列 | 第51-53页 |
| ·RACE法扩增BeNYE1基因的5'末端序列 | 第53-55页 |
| ·BeNYE1基因全长的克隆 | 第55-56页 |
| ·BeNYE1基因组序列的获得 | 第56-57页 |
| ·植物基因组DNA抽提 | 第56页 |
| ·基因组序列的扩增 | 第56-57页 |
| ·DNA和蛋白序列的生物信息学分析 | 第57-58页 |
| ·BeNYE1表达模式分析 | 第58-60页 |
| ·自然生长状态下BeNYE1表达模式分析 | 第58-60页 |
| ·黑暗处理下BeNYE1的表达模式分析 | 第60页 |
| ·叶片总叶绿素含量的测定 | 第60页 |
| ·植物表达载体构建 | 第60-62页 |
| ·互补载体的构建 | 第60-61页 |
| ·过表达载体的构建 | 第61-62页 |
| ·通过电转化法将质粒导入GV3101农杆菌 | 第62页 |
| ·农杆菌感受态制备 | 第62页 |
| ·电击法转化农杆菌 | 第62页 |
| ·菌液PCR鉴定农杆菌阳性转化子 | 第62页 |
| ·花序浸染法转化拟南芥植株 | 第62-63页 |
| ·转基因拟南芥的筛选 | 第63页 |
| ·转基因拟南芥的PCR鉴定 | 第63-64页 |
| ·BeNYE1基因功能的验证 | 第64页 |
| ·黑暗处理 | 第64页 |
| ·实时定量PCR检测转基因株系中BeNYE1的表达量 | 第64页 |
| ·叶绿素含量测定 | 第64页 |
| ·烟草叶片瞬时过表达 | 第64-65页 |
| ·BeNYE1在野生型拟南芥中的组成型过表达 | 第65-66页 |
| 第二节 金丝慈竹BeNAC1的分离及其功能分析 | 第66-76页 |
| 1 实验材料 | 第66-67页 |
| ·植物材料 | 第66页 |
| ·菌株与载体 | 第66页 |
| ·培养基 | 第66页 |
| ·YPD培养基 | 第66页 |
| ·SD培养基 | 第66页 |
| ·实验试剂 | 第66-67页 |
| 2 实验方法 | 第67-76页 |
| ·金丝慈竹RNA抽提、检测、定量以及第一链cDNA的合成 | 第67页 |
| ·RT-PCR扩增BeNAC1基因中间片断 | 第67页 |
| ·RACE法扩增BeNAC1基因的3'末端序列 | 第67-68页 |
| ·RACE法扩增BeNAC1基因的5'末端序列 | 第68-70页 |
| ·BeNAC1基因全长的克隆 | 第70页 |
| ·BeNAC1基因组序列的获得 | 第70页 |
| ·DNA和蛋白序列的生物信息学分析 | 第70页 |
| ·BeNAC1的亚细胞定位 | 第70-71页 |
| ·BeNAC1的转录激活活性验证 | 第71-73页 |
| ·载体构建 | 第71-72页 |
| ·酵母感受态细胞制备与转化 | 第72页 |
| ·酵母报告基因LacZ的检测(克隆转移滤纸分析法) | 第72-73页 |
| ·BeNAC1的表达模式分析 | 第73页 |
| ·自然生长状态下BeNAC1表达模式分析 | 第73页 |
| ·黑暗处理下BeNAC1的表达模式分析 | 第73页 |
| ·植物表达载体构建 | 第73-74页 |
| ·互补载体的构建 | 第73-74页 |
| ·过表达载体的构建 | 第74页 |
| ·BeNAC1基因功能的验证 | 第74-75页 |
| ·黑暗处理 | 第75页 |
| ·实时定量PCR检测转基因株系中BeNAC1的表达量 | 第75页 |
| ·叶绿素含量测定 | 第75页 |
| ·BeNAC1在野生型拟南芥中的组成型过表达 | 第75-76页 |
| 第3章 实验结果 | 第76-103页 |
| 第一节 金丝慈竹BeNYE1的分离及其功能分析 | 第76-90页 |
| 1 BeNYE1全长cDNA序列的获得 | 第76-78页 |
| 2 BeNYE1基因组序列的获得 | 第78-79页 |
| 3 BeNYE1生物信息学分析 | 第79-82页 |
| ·一级结构序列分析 | 第79页 |
| ·二级结构预测 | 第79-80页 |
| ·亚细胞定位预测 | 第80-81页 |
| ·BeNYE1具有高度保守性 | 第81-82页 |
| ·BeNYE1的系统发生树 | 第82页 |
| 4 BeNYE1在金丝慈竹中的表达模式分析 | 第82-84页 |
| ·BeNYE1在金丝慈竹中随着叶片自然衰老而上调 | 第83-84页 |
| ·BeNYE1在金丝慈竹中受黑暗诱导衰老而上调 | 第84页 |
| 5 过表达BeNYE1能够明显促进叶绿素降解 | 第84-86页 |
| ·BeNYE1在烟草叶片中的瞬时超量表达引起了叶片黄化 | 第84-85页 |
| ·BeNYE1在拟南芥中的组成型过表达导致了转基因植株的黄化 | 第85-86页 |
| 6 BeNYEl能异源互补拟南芥nye1-1滞绿突变体 | 第86-90页 |
| ·BeNYE1互补转基因株系的获得 | 第87页 |
| ·互补转基因株系叶片的离体黑暗诱导 | 第87-89页 |
| ·互补转基因株系的自然衰老 | 第89-90页 |
| 第二节 金丝慈竹BeNAC1的分离及其功能分析 | 第90-103页 |
| 1 BeNAC1全长cDNA序列的获得 | 第90-92页 |
| 2 BeNAC1基因组序列的获得 | 第92-93页 |
| 3 BeNAC1属于NAC转录因子家族 | 第93-96页 |
| ·BeNAC1序列BLAST分析 | 第93页 |
| ·BeNAC1具有高度保守的NAC结构域 | 第93-94页 |
| ·BeNAC1属于NAP亚家族 | 第94-96页 |
| 4 BeNAC1定位于细胞核 | 第96-97页 |
| 5 BeNAC1具有转录激活活性 | 第97-98页 |
| 6 BeNAC1的表达模式与AtNAP相似 | 第98-99页 |
| 7 BeNAC1能回复拟南芥nap突变体的滞绿表型 | 第99-101页 |
| 8 过表达BeNAC1引起了拟南芥野生型的早衰 | 第101-103页 |
| 第4章 讨论 | 第103-107页 |
| 1 BeNYE1参与了金丝慈竹叶片衰老过程中叶绿素降解代谢的调控 | 第103-104页 |
| 2 BeNAC1编码一个NAP-Like的NAC家族转录因子,参与了金丝慈竹叶片衰老的调控 | 第104-106页 |
| 3 拟南芥为竹类植物基因功能的研究提供了新出路 | 第106-107页 |
| 附录 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-121页 |
| 攻读博士期间已发表论文及待发表论文 | 第121-122页 |
| 详细摘要 | 第122-124页 |
| abstract | 第124-126页 |
