| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 第1章 文献综述 | 第8-17页 |
| 1.1 过氧化氢酶研究进展 | 第8-13页 |
| 1.1.1 CAT的发现及分类 | 第8-9页 |
| 1.1.1.1 CAT的发现 | 第8页 |
| 1.1.1.2 CAT的分类 | 第8-9页 |
| 1.1.2 CAT的结构特点和功能 | 第9-10页 |
| 1.1.2.1 单功能CAT的结构特点和功能 | 第9页 |
| 1.1.2.2 双功能CAT的结构特点和功能 | 第9-10页 |
| 1.1.3 CAT基因的表达特性 | 第10-11页 |
| 1.1.4 CAT基因参与的抗逆反应 | 第11-13页 |
| 1.1.4.1 冷和热胁迫 | 第11页 |
| 1.1.4.2 干旱胁迫 | 第11-12页 |
| 1.1.4.3 盐胁迫 | 第12-13页 |
| 1.2 黄瓜抗逆性研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2.1 黄瓜耐冷性 | 第13-14页 |
| 1.2.2 黄瓜耐热性 | 第14页 |
| 1.2.3 黄瓜耐旱性 | 第14-15页 |
| 1.2.4 黄瓜耐盐性 | 第15页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第15-17页 |
| 1.3.1 研究目的 | 第15-16页 |
| 1.3.2 研究意义 | 第16-17页 |
| 第2章 黄瓜过氧化氢酶基因的生物信息学分析 | 第17-31页 |
| 2.1 实验方法 | 第17-18页 |
| 2.1.1 数据库搜索 | 第17页 |
| 2.1.2 染色体定位及基本参数分析 | 第17页 |
| 2.1.3 黄瓜与其它物种CAT基因的系统进化分析 | 第17页 |
| 2.1.4 CsCAT基因结构分析 | 第17页 |
| 2.1.5 CsCAT基因保守基序分析 | 第17页 |
| 2.1.6 CsCAT基因启动子分析 | 第17-18页 |
| 2.2 结果与分析 | 第18-31页 |
| 2.2.1 CsCAT基因的鉴定及染色体定位 | 第18-19页 |
| 2.2.2 CAT基因序列比对及进化树的构建 | 第19-20页 |
| 2.2.3 CsCAT基因的预测蛋白序列分析 | 第20-25页 |
| 2.2.4 CsCAT基因的内含子分析 | 第25页 |
| 2.2.5 CsCAT基因的保守基序分析 | 第25-26页 |
| 2.2.6 CsCAT基因启动子的顺式作用元件分析 | 第26-31页 |
| 第3章 黄瓜过氧化氢酶基因的表达分析 | 第31-36页 |
| 3.1 材料与方法 | 第31-33页 |
| 3.1.1 材料处理 | 第31页 |
| 3.1.2 试剂与仪器 | 第31页 |
| 3.1.3 引物 | 第31-32页 |
| 3.1.4 RNA的提取和cDNA合成 | 第32页 |
| 3.1.5 CsCAT基因组织表达谱分析 | 第32-33页 |
| 3.1.6 CsCAT基因在逆境胁迫下的表达分析 | 第33页 |
| 3.1.7 CsCAT基因荧光定量PCR分析 | 第33页 |
| 3.2 结果与分析 | 第33-36页 |
| 3.2.1 黄瓜CAT基因组织表达谱分析 | 第33-34页 |
| 3.2.2 黄瓜CAT基因在不同胁迫下的表达谱分析 | 第34-35页 |
| 3.2.3 黄瓜CsCAT3基因在不同胁迫下的表达量分析 | 第35-36页 |
| 第4章 黄瓜过氧化氢酶基因CsCAT3的原核表达 | 第36-54页 |
| 4.1 材料与方法 | 第36-37页 |
| 4.1.1 材料处理 | 第36页 |
| 4.1.2 菌种与载体 | 第36页 |
| 4.1.3 引物设计 | 第36页 |
| 4.1.4 酶和试剂 | 第36-37页 |
| 4.1.5 主要实验仪器和设备 | 第37页 |
| 4.2 实验方法 | 第37-45页 |
| 4.2.1 CsCAT3基因的克隆 | 第37-41页 |
| 4.2.1.1 黄瓜幼苗叶片RNA的提取 | 第37页 |
| 4.2.1.2 逆转录酶合成cDNA第一链 | 第37-38页 |
| 4.2.1.3 RT-PCR扩增CsCAT3基因 | 第38页 |
| 4.2.1.4 从凝胶中回收CsCAT3基因 | 第38页 |
| 4.2.1.5 回收CsCAT3的连接 | 第38-39页 |
| 4.2.1.6 大肠杆菌感受态DH5α的制备 | 第39页 |
| 4.2.1.7 连接产物的转化 | 第39页 |
| 4.2.1.8 质粒DNA的提取 | 第39-40页 |
| 4.2.1.9 阳性克隆的测序 | 第40-41页 |
| 4.2.2 原核表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 4.2.2.1 pMD18-CsCAT3质粒提取 | 第41页 |
| 4.2.2.2 pMD18-CsCAT3与原核表达载体pET32a双酶切 | 第41页 |
| 4.2.2.3 CsCAT3基因和线性化载体pET32a的连接 | 第41页 |
| 4.2.2.4 连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第41页 |
| 4.2.2.5 CsCAT3基因重组质粒的PCR、酶切鉴定及测序 | 第41-42页 |
| 4.2.3 CsCAT3蛋白的诱导表达 | 第42页 |
| 4.2.4 SDS-PAGE电泳检测CsCAT3蛋白表达情况 | 第42-44页 |
| 4.2.5 CsCAT3蛋白可溶性分析 | 第44页 |
| 4.2.6 重组大肠杆菌抗逆性分析 | 第44-45页 |
| 4.3 结果与分析 | 第45-54页 |
| 4.3.1 CsCAT3基因的克隆 | 第45-47页 |
| 4.3.1.1 黄瓜叶片总RNA的提取 | 第45页 |
| 4.3.1.2 RT-PCR扩增CsCAT3基因 | 第45-46页 |
| 4.3.1.3 CsCAT3基因PCR产物胶回收和遗传转化DH5α | 第46页 |
| 4.3.1.4 重组质粒的菌液PCR鉴定 | 第46页 |
| 4.3.1.5 重组质粒的酶切鉴定 | 第46-47页 |
| 4.3.2 CsCAT3基因的原核表达 | 第47-50页 |
| 4.3.2.1 原核表达载体的构建 | 第47-49页 |
| 4.3.2.2 较优条件下CsCAT3蛋白的诱导表达 | 第49-50页 |
| 4.3.2.3 蛋白可溶性分析 | 第50页 |
| 4.3.3 CsCAT3蛋白对大肠杆菌的抗逆性影响 | 第50-54页 |
| 4.3.3.1 耐盐 | 第50-51页 |
| 4.3.3.2 耐旱 | 第51-52页 |
| 4.3.3.3 耐高温 | 第52页 |
| 4.3.3.4 耐低温 | 第52-54页 |
| 第5章 讨论 | 第54-56页 |
| 5.1 CsCAT基因家族生物信息学分析 | 第54页 |
| 5.2 CsCAT基因表达特征分析 | 第54页 |
| 5.3 CsCAT基因胁迫表达分析 | 第54-55页 |
| 5.4 表达系统的选择和较优条件下CsCAT3蛋白的诱导表达 | 第55页 |
| 5.5 CsCAT3的原核表达对大肠杆菌的抗逆性影响 | 第55-56页 |
| 第6章 结论与展望 | 第56-57页 |
| 6.1 结论 | 第56页 |
| 6.2 展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 附录1 英文缩写符号及中英文对照表 | 第65-66页 |
| 附录2 试剂和配方 | 第66-69页 |
| 附录3 CsCAT3基因比对图 | 第69-70页 |
| 个人简历 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
