| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-17页 |
| 1.1 野油菜黄单胞菌的简介 | 第9-10页 |
| 1.2 野油菜黄单胞菌的基础研究 | 第10-11页 |
| 1.2.1 菌种筛选 | 第10页 |
| 1.2.2 培养基的改进 | 第10-11页 |
| 1.2.3 发酵动力学研究 | 第11页 |
| 1.2.4 容氧量对发酵过程的影响 | 第11页 |
| 1.3 基因对黄原胶合成的影响 | 第11-13页 |
| 1.3.1 丙酮酸转移酶基因对黄原胶合成的影响 | 第11-12页 |
| 1.3.2 gum基因簇对黄原胶合成的影响 | 第12页 |
| 1.3.3 UDPGD基因对黄原胶合成的影响 | 第12-13页 |
| 1.3.4 β-淀粉酶基因对黄原胶合成的影响 | 第13页 |
| 1.4 尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶概述 | 第13-14页 |
| 1.5 基因敲除技术 | 第14-15页 |
| 1.6 黄原胶的提取与分离 | 第15页 |
| 1.7 本课题的研究内容 | 第15-17页 |
| 1.7.1 课题研究意义与目的 | 第15-16页 |
| 1.7.2 实验路线 | 第16-17页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第17-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-22页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第17页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.3 培养基 | 第18-20页 |
| 2.1.4 溶液和缓冲液 | 第20-22页 |
| 2.1.5 主要设备 | 第22页 |
| 2.2 主要实验方法 | 第22-27页 |
| 2.2.1 基因组DNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.2 PCR产物的纯化 | 第23-24页 |
| 2.2.3 重组质粒的转化 | 第24页 |
| 2.2.4 重组质粒的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.5 感受态细胞的制备 | 第25页 |
| 2.2.6 黄原胶的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.7 黄原胶的粘度测定 | 第26-27页 |
| 第三章 突变体的获得 | 第27-48页 |
| 3.1 野油菜黄单胞菌基因组DNA提取结果 | 第27页 |
| 3.2 PCR扩增目的基因 | 第27-29页 |
| 3.2.1 引物的设计 | 第27-28页 |
| 3.2.2 PCR的扩增条件 | 第28页 |
| 3.2.3 PCR的反应体系 | 第28页 |
| 3.2.4 目的基因的扩增结果 | 第28-29页 |
| 3.3 重组质粒的转化 | 第29-32页 |
| 3.3.1 连接体系 | 第29-30页 |
| 3.3.2 重组质粒的转化结果 | 第30页 |
| 3.3.3 重组质粒的鉴定结果 | 第30-32页 |
| 3.4 重组自杀性质粒的构建 | 第32-36页 |
| 3.4.1 连接体系 | 第32-33页 |
| 3.4.2 重组自杀性质粒的转化结果 | 第33-34页 |
| 3.4.3 重组自杀性质粒的鉴定结果 | 第34-36页 |
| 3.5 突变体获得及验证结果 | 第36-41页 |
| 3.5.1 突变体获得 | 第36-37页 |
| 3.5.2 突变体的验证 | 第37-41页 |
| 3.6 野油菜黄单胞菌原始菌株和突变菌株遗传特性对比的结果 | 第41-47页 |
| 3.6.1 生长状况对比结果 | 第41-43页 |
| 3.6.2 黄原胶的提取及粘度测试结果 | 第43-44页 |
| 3.6.3 产酶的结果 | 第44-47页 |
| 3.7 本章小结 | 第47-48页 |
| 第四章 突变体的过量表达 | 第48-58页 |
| 4.1 突变体的过量表达 | 第48-52页 |
| 4.1.1 重组过量表达载体的构建 | 第48页 |
| 4.1.2 重组过量表达菌株的筛选 | 第48-50页 |
| 4.1.3 重组过量表达菌株的鉴定结果 | 第50-52页 |
| 4.2 突变体的过量表达菌株遗传特性对比结果 | 第52-57页 |
| 4.2.1 生长状况对比结果 | 第52-54页 |
| 4.2.2 黄原胶的提取及粘度测试结果 | 第54-55页 |
| 4.2.3 产酶的结果 | 第55-57页 |
| 4.3 本章小结 | 第57-58页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 附录A pMD~?19-T载体图谱 | 第65-66页 |
| 附录B 原始菌体的尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶基因的碱基序列 | 第66-67页 |
| 附录C pK18mobSacB质粒图谱 | 第67-68页 |
| 附录D pK18mobSacB质粒上KanR基因的碱基序列 | 第68-69页 |
| 附录E 突变体1的尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶基因的碱基序列 | 第69-70页 |
| 附录F 突变体2的尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶基因的碱基序列 | 第70-71页 |
| 作者简介 | 第71页 |
