| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 引言 | 第13-19页 |
| 0.1 结直肠癌 | 第13-14页 |
| 0.2 Micro RNAs | 第14-16页 |
| 0.3 黑树莓花青素 | 第16-18页 |
| 0.4 研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 第1章 黑树莓花青素对结肠癌miRNAs表达影响 | 第19-31页 |
| 1.1 引言 | 第19页 |
| 1.2 实验材料 | 第19-21页 |
| 1.2.1 动物及细胞系 | 第19页 |
| 1.2.2 主要实验试剂 | 第19-20页 |
| 1.2.3 主要的仪器和耗材 | 第20页 |
| 1.2.4 主要试剂的配置 | 第20-21页 |
| 1.3 实验方法及步骤 | 第21-26页 |
| 1.3.1 小鼠模型构建 | 第21页 |
| 1.3.2 miRNA基因芯片 | 第21-22页 |
| 1.3.3 人结直肠癌细胞培养 | 第22-23页 |
| 1.3.4 HCT-116、HT29、SW480、LoVo细胞的加药处理及收集 | 第23-24页 |
| 1.3.5 总RNA提取 | 第24页 |
| 1.3.6 实时荧光定量PCR | 第24-26页 |
| 1.3.7 统计学方法 | 第26页 |
| 1.4 结果 | 第26-30页 |
| 1.4.1 miRNA基因芯片结果 | 第26-27页 |
| 1.4.2 小鼠结肠组织miR-483-3p的表达 | 第27-28页 |
| 1.4.3 黑树莓花青素对结直肠癌细胞中miR-483-3p的表达影响 | 第28-30页 |
| 1.5 讨论 | 第30-31页 |
| 第2章 结直肠癌中miR-483-3p靶基因及相关信号通路的生物信息学预测和验证 | 第31-49页 |
| 2.1 引言 | 第31页 |
| 2.2 实验材料 | 第31-34页 |
| 2.2.1 细胞株及表达质粒 | 第31页 |
| 2.2.2 主要的实验试剂 | 第31-32页 |
| 2.2.3 主要的仪器和耗材 | 第32-33页 |
| 2.2.4 主要试剂的配置 | 第33-34页 |
| 2.3 实验方法及步骤 | 第34-42页 |
| 2.3.1 生物信息学预测miR-483-3p和DKK3的靶向关系及分析DKK3和miR-483-3p表达和肿瘤患者生存状况关系 | 第34页 |
| 2.3.2 LoVo和SW480细胞培养 | 第34页 |
| 2.3.3 LoVo和SW480细胞加药处理及收集 | 第34页 |
| 2.3.4 质粒信息及提取 | 第34-35页 |
| 2.3.5 LoVo和SW480细胞的转染及收集 | 第35-36页 |
| 2.3.6 总RNA提取 | 第36页 |
| 2.3.7 实时荧光定量PCR | 第36-38页 |
| 2.3.8 LoVo和SW480细胞蛋白提取 | 第38页 |
| 2.3.9 细胞总蛋白质浓度的测定(BCA法) | 第38-39页 |
| 2.3.10 蛋白质免疫印迹(Western Blot) | 第39-42页 |
| 2.3.11 统计学方法 | 第42页 |
| 2.4 结果 | 第42-48页 |
| 2.4.1 生物信息学软件预测DKK3基因是miR-483-3p的靶基因 | 第42-43页 |
| 2.4.2 DKK3和miR-483的表达与结直肠癌患者生存相关性 | 第43-44页 |
| 2.4.3 黑树莓花青素对结直肠癌细胞LoVo和SW480中DKK3的表达影响 | 第44-45页 |
| 2.4.4 沉默质粒作用结直肠癌细胞LoVo和SW480后miR-483-3p的表达 | 第45-46页 |
| 2.4.5 结直肠癌细胞中miR-483-3p-inhibitor作用后DKK3的表达 | 第46页 |
| 2.4.6 结直肠癌细胞中miR-483-3p表达变化对Wnt/β-catenin信号通路及其相关因子的影响 | 第46-48页 |
| 2.5 讨论 | 第48-49页 |
| 第3章 miR-483-3p对结直肠癌细胞生物学特性的影响 | 第49-56页 |
| 3.1 引言 | 第49页 |
| 3.2 实验材料 | 第49-50页 |
| 3.2.1 细胞株及表达质粒 | 第49页 |
| 3.2.2 主要的实验试剂 | 第49-50页 |
| 3.2.3 主要的仪器和耗材 | 第50页 |
| 3.2.4 主要试剂的配制 | 第50页 |
| 3.3 实验方法及步骤 | 第50-52页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第50页 |
| 3.3.2 MTT法检测细胞增殖情况 | 第50-51页 |
| 3.3.3 细胞划痕实验 | 第51-52页 |
| 3.3.4 平板克隆形成实验 | 第52页 |
| 3.3.5 统计学方法 | 第52页 |
| 3.4 结果 | 第52-55页 |
| 3.4.1 miR-483-3p对结直肠癌细胞LoVo和SW480增殖的影响 | 第52-53页 |
| 3.4.2 miR-483-3p对结直肠癌细胞LoVo和SW480迁移能力的影响 | 第53-54页 |
| 3.4.3 miR-483-3p对结直肠癌细胞LoVo和SW480克隆形成能力的影响 | 第54-55页 |
| 3.5 讨论 | 第55-56页 |
| 第4章 结论与展望 | 第56-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及参加科研情况 | 第64-65页 |
