| 摘要 | 第4-8页 |
| ABSRACT | 第8-12页 |
| 第一章 绪论 | 第24-38页 |
| 1.1 生物炼制的发展现状 | 第24-31页 |
| 1.1.1 生物质 | 第25页 |
| 1.1.2 生物质的预处理 | 第25-29页 |
| 1.1.3 生物炼制生产高附加值化学品和生物燃料 | 第29-31页 |
| 1.2 生物炼制面临的问题与挑战 | 第31-32页 |
| 1.2.1 水热法预处理产生的抑制物问题 | 第31-32页 |
| 1.2.2 离子液体预处理残留抑制物问题 | 第32页 |
| 1.3 抑制物耐受策略及应用现状 | 第32-34页 |
| 1.3.1 糠醛的微生物耐受及应用 | 第33页 |
| 1.3.2 离子液体的微生物耐受及应用 | 第33-34页 |
| 1.4 本文的研究意义 | 第34-35页 |
| 1.5 本文的研究内容 | 第35-38页 |
| 第二章 C. tropicalis对半纤维素水解液中复合抑制物响应的代谢组学研究 | 第38-54页 |
| 2.1 引言 | 第38-39页 |
| 2.2 材料和方法 | 第39-42页 |
| 2.2.1 菌种和培养基 | 第39页 |
| 2.2.2 主要试剂和仪器 | 第39页 |
| 2.2.3 发酵条件 | 第39-40页 |
| 2.2.4 发酵液的分析 | 第40页 |
| 2.2.5 生长曲线的测定 | 第40页 |
| 2.2.6 样品的淬灭和代谢物的提取 | 第40-41页 |
| 2.2.7 代谢物的衍生化 | 第41页 |
| 2.2.8 代谢物的分析 | 第41页 |
| 2.2.9 NADH/NAD~+比值的测定 | 第41-42页 |
| 2.2.10 多元数据分析 | 第42页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第42-53页 |
| 2.3.1 抑制物对细胞生长和发酵的影响 | 第42-45页 |
| 2.3.2 多元统计学分析和差异代谢物的确定 | 第45-49页 |
| 2.3.3 不同生长阶段C. tropicalis对抑制物的代谢差异响应 | 第49-53页 |
| 2.4 本章小结 | 第53-54页 |
| 第三章 C. tropicalis对糠醛的耐受性及降解能力研究 | 第54-62页 |
| 3.1 引言 | 第54页 |
| 3.2 材料与方法 | 第54-56页 |
| 3.2.1 菌种和培养基 | 第54-55页 |
| 3.2.2 主要试剂和仪器 | 第55页 |
| 3.2.3 发酵条件 | 第55页 |
| 3.2.4 发酵液的分析 | 第55页 |
| 3.2.5 发酵液中生物量的测定方法和IC_(50)值的计算 | 第55页 |
| 3.2.6 亚甲基蓝染色和细胞生存能力分析 | 第55-56页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第56-60页 |
| 3.3.1 糠醛压力下C. tropicalis的生长曲线和IC_(50)值分析 | 第56-57页 |
| 3.3.2 糠醛压力下C. tropicalis的生存能力分析 | 第57-59页 |
| 3.3.3 C. tropicalis降解糠醛能力解析 | 第59-60页 |
| 3.4 本章小结 | 第60-62页 |
| 第四章 C. tropicalis对糠醛的自诱导降解机理解析 | 第62-86页 |
| 4.1 引言 | 第62页 |
| 4.2 材料与方法 | 第62-75页 |
| 4.2.1 实验菌种和培养基 | 第62-64页 |
| 4.2.2 主要试剂和仪器 | 第64页 |
| 4.2.3 发酵条件 | 第64页 |
| 4.2.4 发酵液的分析 | 第64页 |
| 4.2.5 发酵液中生物量的测定方法 | 第64页 |
| 4.2.6 RNA的提取 | 第64-65页 |
| 4.2.7 琼脂糖凝胶电泳 | 第65页 |
| 4.2.8 RNA反转录 | 第65-66页 |
| 4.2.9 荧光定量PCR | 第66-67页 |
| 4.2.10 化学诱变获得URA缺陷菌株 | 第67-68页 |
| 4.2.11 基因组的提取 | 第68页 |
| 4.2.12 PCR | 第68-69页 |
| 4.2.13 DNA的胶回收 | 第69-70页 |
| 4.2.14 质粒提取 | 第70页 |
| 4.2.15 酶切、连接和大肠杆菌转化 | 第70-71页 |
| 4.2.16 C. tropicalis感受态细胞的制备和电转 | 第71-72页 |
| 4.2.17 C. tropicalis基因敲除盒的构建及ctADH1的敲除 | 第72-73页 |
| 4.2.18 ctADH1敲除菌株的耐受性对比 | 第73页 |
| 4.2.19 蛋白电泳 | 第73-74页 |
| 4.2.20 E.coli异源表达ctADH1和糠醛降解能力分析 | 第74-75页 |
| 4.2.21 NADH/NAD~+比值的测定 | 第75页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第75-84页 |
| 4.3.1 C. tropicalis对糠醛的代谢响应 | 第75-76页 |
| 4.3.2 C. tropicalis对糠醛脱毒和响应机理 | 第76-81页 |
| 4.3.3 E.coli异源表达ctADH1及糠醛降解能力分析 | 第81-84页 |
| 4.4 本章小结 | 第84-86页 |
| 第五章 木糖提高C. tropicalis糠醛降解能力和辅酶循环机理研究 | 第86-96页 |
| 5.1 引言 | 第86页 |
| 5.2 材料与方法 | 第86-88页 |
| 5.2.1 菌种和培养基 | 第87页 |
| 5.2.2 主要试剂和仪器 | 第87页 |
| 5.2.3 发酵条件 | 第87页 |
| 5.2.4 发酵液的分析 | 第87页 |
| 5.2.5 发酵液中生物量的测定方法和IC_(50)值的计算 | 第87-88页 |
| 5.2.6 糠醛降解相关基因ctADH1的荧光定量PCR | 第88页 |
| 5.2.7 NADH/NAD~+比值的测定 | 第88页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第88-94页 |
| 5.3.1 不同碳源对C. tropicalis中糠醛降解速率和生长抑制的影响 | 第88-90页 |
| 5.3.2 不同碳源对C. tropicalis中NADH-NAD~+辅酶平衡的影响 | 第90-92页 |
| 5.3.3 不同碳源对C. tropicalis中糠醛耐受基因ctADH1转录水平的影响 | 第92-94页 |
| 5.4 本章小结 | 第94-96页 |
| 第六章 驯化筛选E. coli离子液体耐受菌株及代谢工程应用 | 第96-114页 |
| 6.1 引言 | 第96-97页 |
| 6.2 材料与方法 | 第97-98页 |
| 6.2.1 菌种和培养基 | 第97页 |
| 6.2.2 主要试剂和仪器 | 第97页 |
| 6.2.3 培养条件、生长曲线测定和比生长速率计算 | 第97-98页 |
| 6.2.4 3-甲基-3-丁烯-1-醇发酵 | 第98页 |
| 6.2.5 离子液体降解分析 | 第98页 |
| 6.2.6 发酵产物3-甲基-3-丁烯-1-醇的检测 | 第98页 |
| 6.2.7 IC_(50)值和的计算 | 第98页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第98-112页 |
| 6.3.1 离子液体驯化菌株的生长分析 | 第98-99页 |
| 6.3.2 离子液体驯化菌株的耐受性分析和发酵生产3-甲基-3-丁烯-1-醇 | 第99-107页 |
| 6.3.3 使用废水中的[BMIM]Ac和[EMIM]Ac作为碳源用于菌体生长和3-甲基-3-丁烯-1-醇发酵 | 第107-112页 |
| 6.4 本章小结 | 第112-114页 |
| 第七章 NaCl提高E. coli离子液体耐受性及代谢工程应用 | 第114-124页 |
| 7.1 引言 | 第114页 |
| 7.2 材料与方法 | 第114-115页 |
| 7.2.1 菌种和培养基 | 第114-115页 |
| 7.2.2 主要试剂和仪器 | 第115页 |
| 7.2.3 培养条件和生长曲线测定 | 第115页 |
| 7.2.4 发酵产物3-甲基-3-丁烯-1-醇的检测 | 第115页 |
| 7.3 结果与讨论 | 第115-121页 |
| 7.3.1 NaCl改善E.coli的生长 | 第115-116页 |
| 7.3.2 NaCl增强E.coli对离子液体的耐受能力 | 第116-119页 |
| 7.3.3 NaCl提高离子液体存在下3-甲基-3-丁烯-1-醇生产能力 | 第119-121页 |
| 7.4 本章小结 | 第121-124页 |
| 第八章 结论与展望 | 第124-128页 |
| 8.1 本文的主要结论 | 第124-125页 |
| 8.2 本文的创新之处 | 第125-126页 |
| 8.3 展望 | 第126-128页 |
| 附录 | 第128-130页 |
| 参考文献 | 第130-142页 |
| 致谢 | 第142-144页 |
| 发表的学术论文及研究成果 | 第144-146页 |
| 作者和导师简介 | 第146-147页 |
| 附件 | 第147-148页 |
