| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 常用英文缩略词表 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-24页 |
| 1 MDRV的研究进展 | 第14-22页 |
| 1.1 MDRV感染简介 | 第14页 |
| 1.2 MDRV病原学特征 | 第14-15页 |
| 1.3 MDRV流行病学 | 第15-16页 |
| 1.4 MDRV分子生物学特征 | 第16-21页 |
| 1.4.1 基因组特征 | 第16-17页 |
| 1.4.2 病毒蛋白及其功能 | 第17-21页 |
| 1.5 MDRV的检测及防治 | 第21-22页 |
| 2 基因表达系统简介 | 第22页 |
| 3 蛋白质的亚细胞定位 | 第22-23页 |
| 4 研究的目的与意义 | 第23-24页 |
| 第二章 MDRV σA蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备 | 第24-44页 |
| 1 材料与方法 | 第24-35页 |
| 1.1 材料 | 第24-25页 |
| 1.1.1 毒(菌)株和载体 | 第24页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第24页 |
| 1.1.3 抗体 | 第24-25页 |
| 1.2 方法 | 第25-35页 |
| 1.2.1 引物的设计与合成 | 第25页 |
| 1.2.2 MDRV-YB σA基因的扩增 | 第25-27页 |
| 1.2.3 重组表达质粒的构建与鉴定 | 第27-30页 |
| 1.2.4 MDRV-YB σA基因的序列分析 | 第30页 |
| 1.2.5 重组质粒在E.coli BL21 (DE3)中的诱导表达 | 第30-31页 |
| 1.2.6 SDS-PAGE 及Western-blot分析 | 第31-32页 |
| 1.2.7 IPTG诱导表达条件的优化 | 第32-33页 |
| 1.2.8 重组蛋白的纯化及浓度测定 | 第33-34页 |
| 1.2.9 兔多克隆抗体的制备及鉴定 | 第34-35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-41页 |
| 2.1 MDRV-YB σA基因的扩增结果 | 第35页 |
| 2.2 重组表达载体的鉴定结果 | 第35-36页 |
| 2.3 重组蛋白SDS-PAGE 及Western-blot分析 | 第36-37页 |
| 2.4 重组蛋白诱导表达条件的优化 | 第37-39页 |
| 2.5 重组σA蛋白的纯化及Western-blot鉴定 | 第39-40页 |
| 2.6 多克隆抗体效价的检测及Western-blot鉴定 | 第40-41页 |
| 3 讨论 | 第41-44页 |
| 第三章 MDRV σA基因在真核细胞中的表达及其亚细胞定位 | 第44-62页 |
| 1 材料与方法 | 第44-52页 |
| 1.1 材料 | 第44-45页 |
| 1.1.1 质粒和细胞 | 第44页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第44页 |
| 1.1.3 抗体 | 第44页 |
| 1.1.4 主要仪器设备 | 第44-45页 |
| 1.2 方法 | 第45-52页 |
| 1.2.1 引物的设计与合成 | 第45页 |
| 1.2.2 MDRV-YB σA基因的扩增 | 第45页 |
| 1.2.3 重组表达质粒的构建与鉴定 | 第45-48页 |
| 1.2.4 细胞的复苏与传代培养 | 第48-49页 |
| 1.2.5 pCI-flag-σA瞬时转染不同细胞系 | 第49页 |
| 1.2.6 MDRV-YB σA mRNA表达水平的半定量RT-PCR检测 | 第49-50页 |
| 1.2.7 σA蛋白的Western-blot分析 | 第50-51页 |
| 1.2.8 MDRV σA蛋白在体外表达试验中的亚细胞定位研究 | 第51-52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-59页 |
| 2.1 MDRV-YB σA基因的扩增结果 | 第52-53页 |
| 2.2 真核表达质粒pCI-flag-σA的鉴定 | 第53-54页 |
| 2.3 MDRV-YB σA mRNA水平的检测结果 | 第54页 |
| 2.4 σA蛋白的Western-blot分析 | 第54-56页 |
| 2.5 σA蛋白亚细胞定位 | 第56-59页 |
| 2.5.1 σA蛋白亚细胞位置的预测结果 | 第56页 |
| 2.5.2 免疫荧光试验检测MDRV σA在不同细胞系内的表达及分布结果 | 第56-58页 |
| 2.5.3 Western-blot检测σA在细胞质和细胞核的表达结果 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-62页 |
| 第四章 总结 | 第62-63页 |
| 1 结论 | 第62页 |
| 2 展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 附录 | 第69-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
