| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 一、前言 | 第8-16页 |
| 1 G 蛋白偶联受体的高阶聚化 | 第8-10页 |
| 1.1 GPCRS 的二聚化 | 第8-9页 |
| 1.2 GPCRS 的异源三聚化 | 第9页 |
| 1.3 GPCRs 二聚化及三聚化的病理生理学功能 | 第9-10页 |
| 2 AT_1R、B_1R 和 B_2R 系统 | 第10-11页 |
| 3 蛋白质-蛋白质相互作用的研究方法 | 第11-15页 |
| 3.1 SRET 技术 | 第11-13页 |
| 3.2 PCAs 与 RET 技术相结合 | 第13-15页 |
| 4 课题的目的意义及设计思路 | 第15-16页 |
| 二、材料和方法 | 第16-32页 |
| 1 实验材料 | 第16-18页 |
| 1.1 质粒、菌株和细胞 | 第16页 |
| 1.2 生化试剂及试剂盒 | 第16-17页 |
| 1.3 主要试剂的制备 | 第17-18页 |
| 1.4 实验用主要仪器 | 第18页 |
| 2 实验方法 | 第18-32页 |
| 2.1 重构表达载体 | 第18-24页 |
| 2.2 培养细胞 HEK293T | 第24-25页 |
| 2.3 细胞瞬时转染 | 第25-27页 |
| 2.4 BRET~1检测 AT_1R 与 B_1R 的异源二聚化 | 第27-29页 |
| 2.5 BiLC 验证 AT_1R/B_2R 以及 AT_1R/AT_2R 之间的相互作用 | 第29-30页 |
| 2.6 验证 AT_1R、B_1R 与 B_2R 之间的相互作用 | 第30-32页 |
| 三、结果 | 第32-51页 |
| 1 表达载体的构建 | 第32-43页 |
| 1.1 重组质粒 NRlu-pcDNA3.124 | 第32-33页 |
| 1.2 重组质粒 CRlu-pcDNA3.125 | 第33-35页 |
| 1.3 重组质粒 NRlu-AT_1R-pcDNA3.127 | 第35-37页 |
| 1.4 重组质粒 CRlu-B_2R-pcDNA3.129 | 第37-39页 |
| 1.5 重组质粒 CRlu-AT_2R-pcDNA3.131 | 第39-41页 |
| 1.6 重组质粒 RLuc-AT_1R-pcDNA3.133 | 第41-43页 |
| 2 HEK293T 细胞的培养 | 第43页 |
| 3 转染 HEK293T 细胞 | 第43-44页 |
| 4 BRET1检测 AT_1R 与 B_1R 之间的相互作用 | 第44-48页 |
| 4.1 荧光和发光检测 | 第44-45页 |
| 4.2 BRET~1鉴定受体的异源二聚化 | 第45-46页 |
| 4.3 BRET~1饱和实验 | 第46-47页 |
| 4.4 BRET~1配体诱导实验 | 第47-48页 |
| 5 BiLC 验证 AT_1R/B_2R 和 AT_1R/AT_2R 之间的相互作用 | 第48-49页 |
| 6 SRET2验证 AT_1R、B_1R 与 B_2R 之间的相互作用 | 第49-50页 |
| 6.1 SRET~2鉴定实验 | 第49页 |
| 6.2 SRET~2饱和实验 | 第49-50页 |
| 7 BiLC+BRET 方法验证 AT_1R、B_1R 与 B_2R 之间的相互作用 | 第50-51页 |
| 四、讨论 | 第51-53页 |
| 1 AT_1R/B_1R 的异源二聚化 | 第51页 |
| 2 双分子发光互补技术 | 第51页 |
| 3 AT_1R/B_1R/B_2R 的异源三聚化 | 第51-53页 |
| 五、结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 中英文符号对照表 | 第58-59页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
