| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第12-23页 |
| 1.1 马铃薯 | 第12-14页 |
| 1.1.1 中国马铃薯生产概况 | 第12-13页 |
| 1.1.2 马铃薯种质资源 | 第13-14页 |
| 1.2 马铃薯晚疫病 | 第14-16页 |
| 1.2.1 马铃薯晚疫病的发生和危害 | 第14-15页 |
| 1.2.2 马铃薯晚疫病的防治措施 | 第15-16页 |
| 1.3 热激蛋白 | 第16-20页 |
| 1.3.1 热激蛋白的分类及分布特点 | 第16-17页 |
| 1.3.2 热激蛋白基因的结构与功能 | 第17-20页 |
| 1.3.3 胁迫环境与植物小热激蛋白基因的表达 | 第20页 |
| 1.4 植物遗传转化的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.4.1 植物遗传转化的方法 | 第20-21页 |
| 1.4.2 植物表达载体与农杆菌遗传转化 | 第21页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第21-23页 |
| 第二章 马铃薯小热激蛋白sHSP-F基因的克隆及生物信息学分析 | 第23-32页 |
| 1 材料与方法 | 第23-26页 |
| 1.1 材料 | 第23-24页 |
| 1.1.1 样品来源及保存 | 第23页 |
| 1.1.2 供试菌种 | 第23页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第23-24页 |
| 1.1.4 培养基 | 第24页 |
| 1.1.5 试剂及配置 | 第24页 |
| 1.2 方法 | 第24-26页 |
| 1.2.1 组培苗的培养 | 第24页 |
| 1.2.2 晚疫病菌孢子悬浮液的制备 | 第24-25页 |
| 1.2.3 实生苗活体接种 | 第25页 |
| 1.2.4 总RNA的提取 | 第25页 |
| 1.2.5 引物设计及PCR扩增 | 第25-26页 |
| 2 结果与分析 | 第26-30页 |
| 2.1 RNA的提取及质量检测 | 第26-27页 |
| 2.2 sHSP-F基因的克隆及基因序列分析 | 第27-30页 |
| 3 小结与讨论 | 第30-32页 |
| 3.1 小结 | 第30页 |
| 3.2 讨论 | 第30-32页 |
| 3.2.1 植物总RNA的提取方法 | 第30页 |
| 3.2.2 sHSP-F基因的克隆及序列分析 | 第30-32页 |
| 第三章 sHSP-F植物表达载体的构建及农杆菌转化 | 第32-45页 |
| 1 材料与方法 | 第32-38页 |
| 1.1 材料 | 第32-33页 |
| 1.1.1 供试材料 | 第32页 |
| 1.1.2 主要仪器和耗材 | 第32-33页 |
| 1.1.3 试剂 | 第33页 |
| 1.1.4 培养基及溶液 | 第33页 |
| 1.2 方法 | 第33-38页 |
| 1.2.1 sHSP-FPCR产物的扩增 | 第33页 |
| 1.2.2 目的基因sHSP-FPCR产物的纯化 | 第33-34页 |
| 1.2.3 PCR产物的连接、转化、克隆 | 第34页 |
| 1.2.4 阳性克隆重组子鉴定 | 第34-35页 |
| 1.2.5 序列测定 | 第35页 |
| 1.2.6 重组pMD18-T质粒提取 | 第35页 |
| 1.2.7 重组质粒双酶切 | 第35-36页 |
| 1.2.8 切胶回收 | 第36页 |
| 1.2.9 植物表达载体p1301m的提取、双酶切与纯化 | 第36页 |
| 1.2.10 目的基因sHSP-F与p1301m连接 | 第36-37页 |
| 1.2.11 重组植物表达载体双酶切及测序验证 | 第37页 |
| 1.2.12 电击转化法 | 第37-38页 |
| 1.2.13 热激转化法 | 第38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-42页 |
| 3 小结与讨论 | 第42-45页 |
| 3.1 小结 | 第42-43页 |
| 3.2 讨论 | 第43-45页 |
| 3.2.1 植物表达载体的构建 | 第43页 |
| 3.2.2 两种转化农杆菌方法的比较及阳性克隆验证 | 第43-45页 |
| 第四章 sHSP-F基因胁迫诱导表达初步分析 | 第45-53页 |
| 1 材料与方法 | 第45-48页 |
| 1.1 材料 | 第45-46页 |
| 1.1.1 供试材料 | 第45页 |
| 1.1.2 培养基 | 第45页 |
| 1.1.3 主要仪器和试剂 | 第45-46页 |
| 1.2 方法 | 第46-48页 |
| 1.2.1 试验材料培养 | 第46页 |
| 1.2.2 引物设计 | 第46页 |
| 1.2.3 不同胁迫环境下马铃薯易感品种FW的处理方法 | 第46-47页 |
| 1.2.4 总RNA的提取 | 第47页 |
| 1.2.5 RT-PCR | 第47页 |
| 1.2.6 实时荧光定量PCR基因表达检测 | 第47-48页 |
| 1.2.7 数据分析 | 第48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-51页 |
| 2.1 总RNA浓度和质量检测 | 第48页 |
| 2.2 sHSP-F基因检测体系的建立 | 第48-49页 |
| 2.3 qPCRsHSP-F基因表达检测结果 | 第49-51页 |
| 3 小结与讨论 | 第51-53页 |
| 第五章 全文总结与展望 | 第53-55页 |
| 5.1 全文总结 | 第53-54页 |
| 5.2 展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 附录 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 个人简介 | 第64页 |
