| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-20页 |
| 1 牙周组织再生与釉基质蛋白 | 第11-14页 |
| 1.1 牙周组织再生 | 第11-12页 |
| 1.2 釉基质蛋白 | 第12-14页 |
| 2 重组釉原蛋白的获得 | 第14-18页 |
| 2.1 釉原蛋白 | 第14-15页 |
| 2.2 重组DNA技术 | 第15-16页 |
| 2.3 重组蛋白药物 | 第16-18页 |
| 3 本课题研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 4 技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 rhAm在原核表达系统的构建、表达及制备 | 第20-43页 |
| 1 实验材料 | 第20-26页 |
| 1.1 主要试剂材料 | 第20-21页 |
| 1.2 主要仪器设备及耗材 | 第21-22页 |
| 1.3 主要试剂配制 | 第22-26页 |
| 2 实验方法 | 第26-38页 |
| 2.1 pET-22b-Am-His载体的构建 | 第26-33页 |
| 2.2 pET-22b-Am-His质粒在E.coliWK6中的小量表达及鉴定 | 第33-37页 |
| 2.3 pET-22b-Am-His质粒在E.coliWK6中的大量表达、纯化及鉴定 | 第37-38页 |
| 3 实验结果 | 第38-41页 |
| 3.1 pET-22b-Am-His载体的构建 | 第38-39页 |
| 3.2 rhAm的小量表达 | 第39-40页 |
| 3.3 rhAm的纯化及鉴定 | 第40-41页 |
| 4 本章小结与讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 rhAm在真核表达系统的构建、表达及制备 | 第43-63页 |
| 1 实验材料 | 第43-48页 |
| 1.1 主要试剂材料 | 第43-45页 |
| 1.2 主要仪器设备及耗材 | 第45-46页 |
| 1.3 主要试剂配制 | 第46-48页 |
| 2 实验方法 | 第48-56页 |
| 2.1 pCMV-Am-His载体和pPIC9K-Am-His载体的构建 | 第48-51页 |
| 2.2 pCMV-Am-His质粒在HEK293F细胞中的小量瞬转表达 | 第51-53页 |
| 2.3 pPIC9K-Am-His质粒在毕赤酵母GS115菌株中的小量表达及鉴定 | 第53-55页 |
| 2.4 HEK293F细胞中表达蛋白的纯化 | 第55-56页 |
| 3 实验结果 | 第56-61页 |
| 3.1 表达载体的构建 | 第56-58页 |
| 3.2 pCMV-Am-His质粒在HEK293F细胞中的小量瞬转表达 | 第58-59页 |
| 3.3 多拷贝菌株的筛选 | 第59-60页 |
| 3.4 HEK293F细胞中表达蛋白的纯化 | 第60-61页 |
| 4 本章小结与讨论 | 第61-63页 |
| 第四章 rhAm生物学活性检测 | 第63-76页 |
| 1 实验材料 | 第63-65页 |
| 1.1 主要试剂材料 | 第63-64页 |
| 1.2 主要仪器设备及耗材 | 第64-65页 |
| 1.3 主要试剂配制 | 第65页 |
| 2 实验方法 | 第65-70页 |
| 2.1 细胞的复苏、传代与冻存 | 第65-66页 |
| 2.2 猪釉基质蛋白(pEMPs)溶解液的配制 | 第66-67页 |
| 2.3 rhAm对hPDLFs与HS-5增殖的影响 | 第67页 |
| 2.4 rhAm对hPDLFs与HS-5迁移的影响 | 第67-68页 |
| 2.5 rhAm对hPDLFs与HS-5粘附的影响 | 第68-69页 |
| 2.6 rhAm对hPDLFs与HS-5细胞内ALP水平的影响 | 第69页 |
| 2.7 rhAm对HS-5中成骨分化标志物蛋白表达的影响 | 第69-70页 |
| 3 实验结果 | 第70-74页 |
| 3.1 rhAm对hPDLFs与HS-5增殖的影响 | 第70-71页 |
| 3.2 rhAm对hPDLFs与HS-5迁移的影响 | 第71-72页 |
| 3.3 rhAm对hPDLFs与HS-5粘附的影响 | 第72-73页 |
| 3.4 rhAm对hPDLFs与HS-5细胞内ALP水平的影响 | 第73-74页 |
| 3.5 rhAm对HS-5中成骨分化标志物蛋白表达的影响 | 第74页 |
| 4 本章小结与讨论 | 第74-76页 |
| 第五章 全文总结与展望 | 第76-77页 |
| 1 全文总结 | 第76页 |
| 2 展望 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
