| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 一、引言 | 第15-29页 |
| 1.1 高等植物细胞壁组分 | 第15-19页 |
| 1.1.1 纤维素 | 第15-16页 |
| 1.1.2 木聚糖 | 第16-17页 |
| 1.1.3 甘露聚糖 | 第17-18页 |
| 1.1.4 木质素 | 第18-19页 |
| 1.1.5 果胶 | 第19页 |
| 1.2 棉纤维发育研究进展 | 第19-22页 |
| 1.2.1 棉纤维的发育过程 | 第20-21页 |
| 1.2.2 棉纤维发育的分子机制 | 第21-22页 |
| 1.3 植物次生壁转录调控研究进展 | 第22-25页 |
| 1.3.1 转录开关因子 | 第22-23页 |
| 1.3.2 次级转录因子 | 第23-24页 |
| 1.3.3 其他转录因子 | 第24-25页 |
| 1.4 植物KNOX转录因子研究进展 | 第25-27页 |
| 1.5 立题依据和研究意义 | 第27-29页 |
| 二、实验材料 | 第29-31页 |
| 2.1 植物材料 | 第29页 |
| 2.2 载体和菌种 | 第29页 |
| 2.3 化学试剂 | 第29页 |
| 2.4 试剂盒与工具酶 | 第29页 |
| 2.5 常用储液及培养基 | 第29页 |
| 2.6 常用缓冲液 | 第29-30页 |
| 2.7 仪器设备及实验器材 | 第30页 |
| 2.8 PCR反应引物合成及DNA测序 | 第30-31页 |
| 三、实验方法 | 第31-42页 |
| 3.1 CTAB法棉花叶片gDNA的提取 | 第31页 |
| 3.2 棉纤维RNA的提取及逆转录 | 第31-32页 |
| 3.2.1 棉纤维RNA的提取 | 第31页 |
| 3.2.2 RNA逆转录成cDNA | 第31-32页 |
| 3.3 PCR反应 | 第32-33页 |
| 3.4 实时荧光定量PCR | 第33页 |
| 3.5 转录组分析 | 第33-35页 |
| 3.5.1 建库测序流程 | 第33-34页 |
| 3.5.2 建库分析流程 | 第34-35页 |
| 3.6 CaCl_2法制备E.coli感受态细胞 | 第35页 |
| 3.7 酵母单杂交载体构建 | 第35-37页 |
| 3.7.1 CESA基因启动子的克隆 | 第35-36页 |
| 3.7.2 目的片段与pBluscript SK连接 | 第36页 |
| 3.7.3 热激法将连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第36页 |
| 3.7.4 质粒提取与测序 | 第36页 |
| 3.7.5 目的片段与终载体连接 | 第36-37页 |
| 3.8 酵母单杂交 | 第37-38页 |
| 3.8.1 pBait-AbAi质粒线性化 | 第37页 |
| 3.8.2 酵母感受态的制备 | 第37页 |
| 3.8.3 pBait-pAbAi质粒转化酵母感受态细胞 | 第37页 |
| 3.8.4 Aureobasidin A(AbA)最低抑制浓度的确定 | 第37-38页 |
| 3.8.5 酵母单杂交筛选 | 第38页 |
| 3.9 棉纤维树脂(LR White)半薄切片 | 第38页 |
| 3.9.1 材料的固定 | 第38页 |
| 3.9.2 脱水 | 第38页 |
| 3.9.3 包埋 | 第38页 |
| 3.9.4 切片制作 | 第38页 |
| 3.10 棉花纤维石蜡切片 | 第38-40页 |
| 3.10.1 固定液的配置及样品固定 | 第39页 |
| 3.10.2 逐级脱水 | 第39页 |
| 3.10.3 浸蜡 | 第39页 |
| 3.10.4 石蜡切片制作 | 第39页 |
| 3.10.5 脱蜡及复水 | 第39-40页 |
| 3.10.6 染色及装片 | 第40页 |
| 3.11 硫酸蒽酮法提取成熟棉纤维纤维素 | 第40页 |
| 3.11.1 棉纤维细胞壁(AIR)提取 | 第40页 |
| 3.11.2 结晶纤维素的测定 | 第40页 |
| 3.12 乙酰溴法提取成熟棉纤维木质素 | 第40-42页 |
| 3.12.1 成熟棉纤维的清洗 | 第40-41页 |
| 3.12.2 木质素标准曲线的制作 | 第41页 |
| 3.12.3 木质素含量的测定 | 第41-42页 |
| 四、实验结果 | 第42-59页 |
| 4.1 GhKNL1转基因棉花鉴定及表达量分析 | 第42-45页 |
| 4.1.1 T2代和T3代GhKNL1 RNAi转基因棉花阳性苗鉴定 | 第42页 |
| 4.1.2 T2代和T3代GhKNL1 RNAi转基因棉花KNL1基因的表达分析 | 第42-44页 |
| 4.1.3 T2代和T3代GhKNL1显性抑制转基因棉花阳性苗鉴定 | 第44页 |
| 4.1.4 T2代和T3代GhKNL1显性抑制转基因棉花KNL1基因的表达分析 | 第44-45页 |
| 4.2 T2代和T3代转基因棉花表型分析 | 第45-48页 |
| 4.2.1 T2代和T3代转基因棉花纤维长度的测量 | 第45-46页 |
| 4.2.2 18DPA棉纤维横切半薄树脂切片染色观察 | 第46页 |
| 4.2.3 27DPA、30DPA、33DPA棉纤维石蜡切片染色观察 | 第46-47页 |
| 4.2.4 扫描电子显微镜观察成熟棉纤维 | 第47-48页 |
| 4.3 GhKNL1 RNAi转基因棉花成熟棉纤维细胞壁组分分析 | 第48-49页 |
| 4.4 棉纤维品质分析 | 第49-50页 |
| 4.5 GhKNL1 RNAi转基因棉花18DPA纤维转录组分析及验证 | 第50-54页 |
| 4.5.1 转录组样品的制备和检测 | 第50页 |
| 4.5.2 GhKNL1在棉纤维次生壁发育过程中发挥重要的调控作用 | 第50-51页 |
| 4.5.3 转录组结果验证 | 第51-52页 |
| 4.5.4 转录组测序差异基因分析 | 第52-54页 |
| 4.6 棉花次生壁发育相关的纤维素合酶基因的表达分析 | 第54-57页 |
| 4.6.1 GhCESA基因与GhKNL1基因在棉纤维发育中的表达谱分析 | 第54-56页 |
| 4.6.2 GhCESA基因在GhKNL1 RNAi转基因棉花中的表达分析 | 第56-57页 |
| 4.7 酵母单杂交寻找转录因子GhKNL1的下游靶基因 | 第57-59页 |
| 五、讨论 | 第59-62页 |
| 5.1 GhKNL1基因参与棉花纤维次生壁发育的调控 | 第59页 |
| 5.2 GhKNL1基因调控次生壁发育相关的纤维素合酶基因的表达 | 第59-60页 |
| 5.3 GhKNL1影响棉纤维的纤维素沉积 | 第60-61页 |
| 5.4 GhKNL1转录因子可能在棉纤维次生壁发育调控网络的上游 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-71页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第71-72页 |
| 附录 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
