| 摘要 | 第2-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 引言 | 第8-12页 |
| 材料与方法 | 第12-22页 |
| 1 受试细胞 | 第12页 |
| 2 主要试剂和材料 | 第12-14页 |
| 3 仪器设备 | 第14页 |
| 4 人成骨细胞(Saos-2)的传代培养、冻存、复苏 | 第14-15页 |
| 4.1 Saos-2的传代培养 | 第14-15页 |
| 4.2 Saos-2的冻存 | 第15页 |
| 4.3 Saos-2的复苏 | 第15页 |
| 5 CCK8检测技术 | 第15-16页 |
| 5.1 CdCl_2诱导的Saos-2细胞损伤模型 | 第15页 |
| 5.2 CP对CdCl_2诱导的Saos-2细胞增殖的影响 | 第15-16页 |
| 5.3 不同的抑制剂对Saos-2细胞活力的影响 | 第16页 |
| 5.4 si-RNA对Saos-2细胞活力的影响 | 第16页 |
| 6 荧光定量PCR检测技术 | 第16-18页 |
| 6.1 RNAiso Plus法提取细胞总RNA | 第16-17页 |
| 6.2 RNA纯度及浓度的检测 | 第17页 |
| 6.3 逆转录反应 | 第17页 |
| 6.4 cDNA扩增反应 | 第17-18页 |
| 6.5 琼脂糖凝胶电泳 | 第18页 |
| 7 免疫印迹技术 | 第18-20页 |
| 7.1 细胞总蛋白的提取 | 第18-19页 |
| 7.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第19-20页 |
| 8 si-RNA脂质体转染技术 | 第20-21页 |
| 8.1 转染效率的检测 | 第20页 |
| 8.2 si-RNA转染Saos-2细胞 | 第20-21页 |
| 9 细胞内、外液中Pro-Hyp和Gly-Pro-Hyp含量的测定 | 第21页 |
| 9.1 色谱条件 | 第21页 |
| 9.2 标准品的配制 | 第21页 |
| 9.3 样品溶液的制备 | 第21页 |
| 10 统计学分析 | 第21-22页 |
| 结果 | 第22-38页 |
| 1 CdCl_2对Saos-2细胞存活率的影响 | 第22页 |
| 2 CP在Saos-2细胞中诱导细胞毒性的评估 | 第22-23页 |
| 3 CP对CdCl_2诱导的细胞损伤的保护作用 | 第23-24页 |
| 4 si-RNA转染对细胞增殖率的影响 | 第24页 |
| 5 不同的抑制剂对细胞存活率的影响 | 第24-25页 |
| 6 CdCl2诱导Saos-2损伤内CaMKK、AMPK、Runx2mRNA表达的经时变化 | 第25-26页 |
| 7 CP对CdCl_2诱导Saos-2损伤中CaMKK、AMPK、Runx2mRNA表达的影响 | 第26-27页 |
| 8 CP对CdCl_2诱导Saos-2损伤中CaMKK、AMPK、Runx2蛋白水平表达的影响 | 第27-29页 |
| 9 si-CaMKK、si-AMPK的转染效率 | 第29-30页 |
| 10 si-CaMKK对CdCl_2诱导Saos-2损伤中AMPK蛋白表达的影响 | 第30页 |
| 11 si-AMPK对CdCl_2诱导Saos-2损伤中Runx2蛋白表达的影响 | 第30-31页 |
| 12 CaMKK的特异性抑制剂STO-609对CdCl_2诱导的Saos-2损伤中AMPK表达的影响 | 第31-32页 |
| 13 AMPK特异性抑制剂CompoundC对CdCl_2诱导的Saos-2损伤中Runx2表达的影响 | 第32-33页 |
| 14 细胞培养液中Pro-Hyp和Gly-Pro-Hyp的含量检测 | 第33-38页 |
| 14.1 标准曲线的绘制 | 第33-34页 |
| 14.2 重复性验证 | 第34页 |
| 14.3 稳定性验证 | 第34-35页 |
| 14.4 加样回收率验证 | 第35页 |
| 14.5 细胞内液中Pro-Hyp和Gly-Pro-Hyp含量的测定结果 | 第35-38页 |
| 讨论 | 第38-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 综述 | 第52-73页 |
| 综述参考文献 | 第66-73页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第73-74页 |
| 缩略词表 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
