| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7页 |
| 第一章 引言 | 第12-23页 |
| 1.1 研究目的与意义 | 第12页 |
| 1.2 马铃薯Y病毒属病毒(potyviruses)及其基因组结构 | 第12-13页 |
| 1.3 Potyviruses的复制 | 第13-14页 |
| 1.4 Potyviruses的胞间运动 | 第14-15页 |
| 1.5 Potyviruses的长距离运输 | 第15-16页 |
| 1.6 PVY侵染性克隆 | 第16页 |
| 1.7 氯离子通道(Chloridechannels,CLC)蛋白 | 第16-18页 |
| 1.8 蛋白分泌途径与细胞器内pH关系 | 第18-21页 |
| 1.9 胞内pH及CLCs与病毒的关系 | 第21-22页 |
| 1.10 研究内容 | 第22-23页 |
| 第二章 PVY侵染性克隆构建 | 第23-39页 |
| 2.1 材料与方法 | 第23-31页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第23页 |
| 2.1.2 PVY侵染性克隆构建策略 | 第23页 |
| 2.1.3 PVY基因组分段扩增 | 第23-26页 |
| 2.1.4 PVY基因组片段定点无义突变及overlapPCR | 第26-30页 |
| 2.1.5 PVY基因组表达载体构建 | 第30页 |
| 2.1.6 PVY侵染性克的隆致病力分析 | 第30-31页 |
| 2.1.7 PVY侵染性克隆表达外源蛋白 | 第31页 |
| 2.2 结果 | 第31-38页 |
| 2.2.1 PVY基因组片段克隆 | 第31-32页 |
| 2.2.2 PVY基因组片段定点无义突变 | 第32-33页 |
| 2.2.3 PVY基因组重组至表达载体pEarleygate | 第33-34页 |
| 2.2.4 PVY侵染性克隆致病力分析 | 第34-35页 |
| 2.2.5 PVY侵染性克隆表达外源蛋白 | 第35-38页 |
| 2.3 讨论 | 第38-39页 |
| 第三章 CLC-Nt1蛋白参与调节内质网pH | 第39-61页 |
| 3.1 材料与方法 | 第39-47页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第39页 |
| 3.1.2 CLC-Nt1、CLC-Nb1a与CLC-Nb1b基因的克隆 | 第39页 |
| 3.1.3 沉默(VIGS)CLC-Nb1a与CLC-Nb1b基因 | 第39-40页 |
| 3.1.4 敲除(CRISPR/Cas9)CLC-Nb1a与CLC-Nb1b基因 | 第40-41页 |
| 3.1.5 野生型及点突变CLC-Nt1基因回补实验 | 第41-43页 |
| 3.1.6 CLC-Nt1、CLC-Nb1a及CLC-Nb1b基因组织特异性分析 | 第43页 |
| 3.1.7 CLC-Nt1蛋白亚细胞定位观察 | 第43-45页 |
| 3.1.8 内质网与顺面高尔基体pH测定 | 第45-47页 |
| 3.1.9 不同基因型植株叶片氯元素积累量测定 | 第47页 |
| 3.1.10 secGFP蛋白分泌测定 | 第47页 |
| 3.2 结果 | 第47-59页 |
| 3.2.1 CLC-Nt1、CLC-Nb1a及CLC-Nb1b基因的序列分析 | 第47-49页 |
| 3.2.2 CLC-Nt1基因的组织表达特异性分析 | 第49-50页 |
| 3.2.3 沉默CLC-Nb1a及CLC-Nb1b基因后植株表型分析 | 第50页 |
| 3.2.4 敲除CLC-Nb1a及CLC-Nb1b基因后植株表型分析 | 第50-53页 |
| 3.2.5 CLC-Nt1蛋白亚细胞定位分析 | 第53-54页 |
| 3.2.6 CLC-Nt1蛋白对内质网及顺面高尔基体pH的影响 | 第54-56页 |
| 3.2.7 CLC-Nt1蛋白对叶片氯元素含量的影响 | 第56页 |
| 3.2.8 CLC-Nt1蛋白对胞内蛋白分泌途径的影响 | 第56-59页 |
| 3.3 讨论 | 第59-61页 |
| 第四章 CLC-Nt1蛋白参与PVY侵染进程 | 第61-74页 |
| 4.1 材料与方法 | 第61-65页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第61页 |
| 4.1.2 6K2与CLC-Nt1蛋白共定位观察 | 第61-62页 |
| 4.1.3 6K2与CLC-Nt1蛋白免疫共沉淀分析 | 第62-63页 |
| 4.1.4 6K2与CLC-Nt1蛋白酵母双杂交分析 | 第63-64页 |
| 4.1.5 PVY侵染后内质网pH测定及氯离子浓度测量 | 第64页 |
| 4.1.6 瞬时表达6K2蛋白后内质网pH测定及氯离子浓度测量 | 第64页 |
| 4.1.7 PVY侵染后CLC-Nb1基因mRNA相对含量测定 | 第64页 |
| 4.1.8 沉默CLC-Nb1a及CLC-Nb1b基因后PVY相对积累量测定 | 第64-65页 |
| 4.1.9 氯离子通道蛋白抑制剂处理后PVY相对积累量测定 | 第65页 |
| 4.1.10 不同突变体内PVY相对积累量测定及症状观察 | 第65页 |
| 4.2 结果 | 第65-72页 |
| 4.2.1 CLC-Nt1蛋白与PVY6K2蛋白互作分析 | 第65-68页 |
| 4.2.2 PVY侵染或表达6K2蛋白对内质网pH的影响 | 第68-69页 |
| 4.2.3 PVY侵染或表达6K2蛋白对叶片氯离子含量的影响 | 第69页 |
| 4.2.4 PVY侵染对CLC-Nb1基因mRNA含量的影响 | 第69-70页 |
| 4.2.5 沉默CLC-Nb1a及CLC-Nb1b基因对PVY侵染的影响 | 第70页 |
| 4.2.6 敲除CLC-Nb1a及CLC-Nb1b基因对PVY侵染的影响 | 第70-72页 |
| 4.2.7 氯离子通道蛋白抑制剂对PVY侵染的影响 | 第72页 |
| 4.3 讨论 | 第72-74页 |
| 第五章 全文结论 | 第74-75页 |
| 5.1 本文结论 | 第74页 |
| 5.2 本文创新点 | 第74页 |
| 5.3 展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 作者简历 | 第87页 |
