| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 前言 | 第12-20页 |
| 1 概述 | 第12页 |
| 2 培养特性 | 第12-13页 |
| 3 流行病学 | 第13-14页 |
| 4 临床症状及病理变化 | 第14页 |
| 5 诊断 | 第14-16页 |
| 5.1 血清学诊断方法 | 第14-15页 |
| 5.2 分子生物学诊断方法 | 第15-16页 |
| 6 防控 | 第16页 |
| 7 主要抗原 | 第16-18页 |
| 7.1 鞭毛蛋白 | 第16-17页 |
| 7.2 唾液酸酶 | 第17页 |
| 7.3 细胞毒素 | 第17-18页 |
| 7.4 其他毒力因子 | 第18页 |
| 8 研究进展 | 第18-19页 |
| 8.1 生物信息学研究进展 | 第18-19页 |
| 8.2 免疫学研究进展 | 第19页 |
| 9 研究目的与意义 | 第19-20页 |
| 材料与方法 | 第20-35页 |
| 1 材料 | 第20-24页 |
| 1.1 菌株 | 第20页 |
| 1.2 试验动物 | 第20页 |
| 1.3 载体与细胞株 | 第20页 |
| 1.4 抗体与培养液 | 第20页 |
| 1.5 酶与主要试剂 | 第20-21页 |
| 1.6 主要设备仪器 | 第21页 |
| 1.7 主要配制试剂 | 第21-24页 |
| 2 方法 | 第24-35页 |
| 2.1 引物的设计与合成 | 第24页 |
| 2.2 气肿疽梭菌的培养 | 第24-25页 |
| 2.3 气肿疽梭菌DNA的提取 | 第25页 |
| 2.4 延边株气肿疽FliA基因的扩增 | 第25-26页 |
| 2.5 PCR产物的纯化 | 第26-27页 |
| 2.6 延边株气肿疽FliA基因的克隆 | 第27-29页 |
| 2.7 重组pVAX1-FliA质粒的构建 | 第29-31页 |
| 2.8 重组质粒pVAX1-FliA的大量提取 | 第31-32页 |
| 2.9 Vero细胞的传代培养 | 第32-33页 |
| 2.10 重组真核表达质粒pVAX1-FliA的表达 | 第33页 |
| 2.11 动物免疫试验 | 第33-34页 |
| 2.12 小鼠血清中免疫水平的检测 | 第34页 |
| 2.13 小鼠血清中IgG1、IgG2a水平检测 | 第34页 |
| 2.14 小鼠血清中IFN-γ、IL-4水平检测 | 第34-35页 |
| 结果 | 第35-50页 |
| 1 FliA基因的扩增 | 第35页 |
| 2 重组质粒pMD 19-T-FliA的鉴定 | 第35-37页 |
| 2.1 重组质粒pMD 19-T-FliA的PCR鉴定 | 第35-36页 |
| 2.2 重组质粒pMD 19-T-FliA的双酶切鉴定 | 第36-37页 |
| 3 FliA基因克隆产物的序列测定及分析 | 第37-42页 |
| 3.1 FliA基因核苷酸及氨基酸全序列的比对分析 | 第37-39页 |
| 3.2 FliA基因核苷酸的遗传进化树分析 | 第39-40页 |
| 3.3 鞭毛蛋白FliA的理化性质分析 | 第40页 |
| 3.4 鞭毛蛋白FliA的二级结构预测 | 第40-41页 |
| 3.5 鞭毛蛋白FliA的三级结构分子模型 | 第41-42页 |
| 4 重组表达质粒pVAX1-FliA的鉴定 | 第42-43页 |
| 4.1 重组表达质粒pVAX1-FliA的PCR鉴定 | 第42页 |
| 4.2 重组表达质粒pVAX1-FliA的双酶切鉴定 | 第42-43页 |
| 5 pVAX1-FliA质粒中FliA基因表达的鉴定 | 第43-44页 |
| 5.1 IFAT检测FliA基因的表达 | 第43-44页 |
| 6 BALB/c小鼠血清的特异性抗体含量检测结果 | 第44-47页 |
| 6.1 IgG检测结果 | 第44-45页 |
| 6.2 IgG1测定结果 | 第45-46页 |
| 6.3 IgG2a测定结果 | 第46-47页 |
| 7 外周血中细胞因子程度检测 | 第47-50页 |
| 7.1 IL-4测定结果 | 第47-48页 |
| 7.2 IFN-γ测定结果 | 第48-50页 |
| 讨论 | 第50-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 附录A (作者简介) | 第59-60页 |
| 附录B (在研期间发表的论文) | 第60页 |
