摘要 | 第6-8页 |
ABSTRACT | 第8-9页 |
第一章 文献综述 | 第13-45页 |
1.1 植物抗性机制 | 第13-23页 |
1.1.1 植物的抗病性 | 第13-15页 |
1.1.2 植物与病原菌互作的分子机制 | 第15-20页 |
1.1.3 植物抗病基因 | 第20-23页 |
1.2 小麦条锈病的研究概况 | 第23-32页 |
1.2.1 小麦条锈病的危害 | 第23-25页 |
1.2.2 小麦条锈病的研究进展 | 第25-27页 |
1.2.3 小麦抗条锈病基因的研究概况 | 第27-32页 |
1.3 基因功能研究中相关技术的应用 | 第32-43页 |
1.3.1 生物信息学技术 | 第32-33页 |
1.3.2 基因的时空表达技术 | 第33-34页 |
1.3.3 小麦转基因技术 | 第34-36页 |
1.3.4 病毒诱导基因沉默技术 | 第36-43页 |
1.4 本研究的目的及意义 | 第43-45页 |
第二章 BSMV-VIGS 体系的优化探索 | 第45-65页 |
2.1 前言 | 第45-47页 |
2.2 材料、试剂及仪器 | 第47-48页 |
2.2.1 供试材料 | 第47页 |
2.2.2 材料常规接种和培养 | 第47页 |
2.2.3 试剂 | 第47页 |
2.2.4 仪器 | 第47-48页 |
2.3 实验方法 | 第48-56页 |
2.3.1 BSMV-VIGS 载体构建 | 第48-54页 |
2.3.2 BSMV-VIGS 体系的评价 | 第54-56页 |
2.3.3 插入片段的大小对 BSMV-VIGS 的影响 | 第56页 |
2.3.4 插入片段的方向对 BSMV-VIGS 的影响 | 第56页 |
2.3.5 目的基因沉默后的表达模式 | 第56页 |
2.3.6 BSMV 介导的 PDS 在麦穗和种子中的沉默 | 第56页 |
2.4 结果与分析 | 第56-62页 |
2.4.1 小麦叶片总 RNA 的提取 | 第56-57页 |
2.4.2 插入片段的扩增 | 第57-58页 |
2.4.3 插入片段的大小对 BSMV-VIGS 的影响 | 第58-59页 |
2.4.4 插入片段的方向对 BSMV-VIGS 的影响 | 第59页 |
2.4.5 目的基因沉默后的表达模式 | 第59-60页 |
2.4.6 BSMV 介导的 PDS 在麦穗和种子中的沉默 | 第60-62页 |
2.5 讨论与结论 | 第62-65页 |
第三章 小麦抗条锈基因 Yr10 的功能分析 | 第65-87页 |
3.1 前言 | 第65-66页 |
3.2 材料、试剂及仪器 | 第66-67页 |
3.2.1 供试材料 | 第66页 |
3.2.2 材料常规接种和培养 | 第66-67页 |
3.2.3 试剂 | 第67页 |
3.2.4 仪器 | 第67页 |
3.3 实验方法 | 第67-70页 |
3.3.1 候选基因的生物信息学分析 | 第67页 |
3.3.2 BSMV-VIGS 载体构建 | 第67-68页 |
3.3.3 目的基因的 BSMV-VIGS 分析 | 第68-69页 |
3.3.4 基因枪法转化试验 | 第69-70页 |
3.4 结果与分析 | 第70-83页 |
3.4.1 候选序列的生物信息学分析 | 第70-75页 |
3.4.2 候选序列的功能分析(BSMV-VIGS) | 第75-82页 |
3.4.3 候选序列的功能分析(基因枪转化试验) | 第82-83页 |
3.5 讨论与结论 | 第83-87页 |
第四章 小麦 TaMDHAR4 基因的克隆及功能验证 | 第87-112页 |
4.1 前言 | 第87-89页 |
4.2 材料、试剂及仪器 | 第89-90页 |
4.2.1 供试材料 | 第89页 |
4.2.2 材料常规接种和培养 | 第89页 |
4.2.3 试剂 | 第89页 |
4.2.4 仪器 | 第89-90页 |
4.3 实验方法 | 第90-97页 |
4.3.1 RNA 的提取与纯化 | 第90-91页 |
4.3.2 cDNA 第一链的合成 | 第91页 |
4.3.3 引物的设计与合成 | 第91-92页 |
4.3.4 RT-PCR 扩增 | 第92-93页 |
4.3.5 T-easy vector 连接反应 | 第93页 |
4.3.6 感受态细胞的制备及转化 | 第93-94页 |
4.3.7 质粒提取(2.3.1.10) | 第94页 |
4.3.8 质粒的酶切鉴定 | 第94页 |
4.3.9 基因片段的序列测定 | 第94页 |
4.3.10 基因全长的序列拼接及分析 | 第94-95页 |
4.3.11 TaMDHAR4 的表达特征分析 | 第95-96页 |
4.3.12 BSMV-VIGS 介导的 TaMDHAR4 沉默 | 第96-97页 |
4.4 结果与分析 | 第97-109页 |
4.4.1 小麦叶片总 RNA 的提取 | 第97页 |
4.4.2 TaMDHAR4 的全长 cDNA 克隆 | 第97-99页 |
4.4.3 TaMDHAR4 的序列分析 | 第99-102页 |
4.4.4 TaMDHAR4 的表达特征分析 | 第102-105页 |
4.4.5 BSMV-VIGS 介导的 TaMDHAR4 沉默 | 第105-109页 |
4.5 讨论与结论 | 第109-112页 |
全文结论 | 第112页 |
本文创新点 | 第112-113页 |
参考文献 | 第113-135页 |
致谢 | 第135-137页 |
作者简介 | 第137页 |