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ESWT在EPCs移植治疗缺血性皮瓣中的作用与机制研究

摘要第5-7页
Abstract第7-8页
缩略语及符号说明第13-15页
绪论第15-19页
第一部分:内皮祖细胞的分离、培养及鉴定第19-33页
    1. 研究背景第19页
    2. 实验材料第19-21页
        2.1 实验动物第19-20页
        2.2 实验试剂及耗材第20页
        2.3 实验仪器第20-21页
    3 实验方法第21-25页
        3.1 大鼠骨髓单个核细胞分离第21-22页
        3.2 用纤连蛋白包被培养皿第22页
        3.3 EPCs 体外诱导培养第22-23页
        3.4 内皮祖细胞的鉴定第23-25页
            3.4.1 流式细胞学检查第23页
            3.4.2 细胞荧光染色(DiI-ac-LDL 摄入试验以及 FITC-UEA 结合试验)第23-24页
            3.4.3 体外基质胶成管试验第24-25页
        3.5 内皮祖细胞的传代第25页
    4. 结果第25-30页
        4.1 骨髓单个核细胞分离第25-26页
        4.2 内皮祖细胞培养第26-28页
        4.3 流式细胞学分析第28页
        4.4 细胞荧光染色第28-29页
        4.5 成管试验(Tube Formation Assay)第29-30页
    5. 讨论第30-32页
    6、小结第32-33页
第二部分:低能量震波处理内皮祖细胞的量效关系研究第33-54页
    1. 研究背景第33页
    2. 实验材料第33-35页
        2.1 实验动物第33-34页
        2.2 实验试剂及耗材第34页
        2.3 实验仪器第34-35页
    3. 实验方法第35-42页
        3.1 内皮细胞培养第35页
        3.2 EPCs 鉴定第35-36页
        3.3 细胞分组第36页
        3.4 震波处理细胞第36-37页
        3.5 细胞增殖活性的 MTT 试验第37-38页
        3.6 实时定量 PCR 测定成血管因子、凋亡因子、炎症因子以及趋化因子的表达第38-42页
            3.6.1 细胞总 RNA 提取第38-39页
            3.6.2 逆转录合成 cDNA第39页
            3.6.3 实时定量 PCR 扩增第39-42页
        3.7 成管试验第42页
        3.8 统计学分析第42页
    4. 实验结果第42-51页
        4.1 细胞培养和鉴定第42-44页
        4.2 MTT 实验检测细胞活力第44页
        4.3 实时定量 PCR 检测成血管因子的表达第44-46页
        4.4 用实时定量 PCR 检测炎症介质表达第46-47页
        4.5 用实时定量 PCR 检测凋亡指标第47-48页
        4.6. 实时定量 PCR 检测细胞趋化因子的表达第48-49页
        4.7 EPCs 体外成管试验第49-51页
    5. 讨论第51-53页
    6. 小结第53-54页
第三部分:低能量震波在内皮祖细胞移植治疗缺血性皮瓣的体内研究第54-77页
    1. 研究背景第54-55页
    2. 实验材料第55-56页
        2.1 实验动物第55页
        2.2 实验试剂及耗材第55-56页
        2.3 实验仪器第56页
    3. 实验方法第56-64页
        3.1 实验分组第56-57页
        3.2 EPCs 培养第57-58页
        3.3 EPCs 的鉴定第58-59页
        3.4 缺血皮瓣的动物模型建立和体外震波治疗第59-60页
        3.5 用激光多普勒血流仪检测皮瓣血流第60页
        3.6 存活皮瓣面积的测量第60-61页
        3.7 检测成血管因子、凋亡因子、缺氧诱导因子以及趋化因子的基因表达第61页
        3.8 组织学评价和微血管密度第61-62页
        3.9 免疫荧光染色(CLSM)第62-63页
        3.10 TUNEL 试验第63-64页
        3.11 统计学分析第64页
    4. 结果第64-74页
        4.1 细胞培养和鉴定第64-65页
        4.2 皮瓣存活第65-66页
        4.3 皮瓣的局部血流灌注(激光多普勒血流仪检测)第66-67页
        4.4 组织学检查第67-71页
        4.5 组织的 TUNEL 试验第71页
        4.6 成血管因子、趋化因子和凋亡因子的 mRNA 表达第71-74页
    5. 讨论第74-76页
    6. 小结第76-77页
第四部分 低能量震波促进 EPCs 移植的缺血性皮瓣存活的作用机制第77-88页
    1. 研究背景第77页
    2. 实验材料第77-79页
        2.1 实验动物第77页
        2.2 实验试剂及耗材第77-78页
        2.3 实验仪器第78-79页
    3. 实验方法第79-82页
        3.1 实验分组第79页
        3.2 EPCs 培养与鉴定第79-80页
        3.4 缺血皮瓣的动物模型建立和体外震波治疗第80页
        3.5 皮瓣的荧光素造影第80-81页
        3.6 存活皮瓣面积的测量第81页
        3.7 免疫荧光染色第81页
        3.8 real-time PCR 检测皮瓣组织中成血管因子及趋化因子的表达第81-82页
        3.9 统计学分析第82页
    4. 结果第82-86页
        4.1 EPCs 培养及鉴定第82页
        4.2 皮瓣荧光素造影测量皮瓣存活第82-83页
        4.3 免疫荧光染色(CLSM)第83-85页
        4.4 real-time PCR 检测成血管细胞因子及趋化因子的表达第85-86页
    5. 讨论第86-87页
    6. 小结第87-88页
全文总结第88-89页
参考文献第89-96页
致谢第96-97页
攻读博士学位期间发表的学术论文和科研成果目录第97页

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