| 摘要 | 第3-9页 |
| ABSTRACT | 第9-16页 |
| 前言 | 第20-34页 |
| 1 肠出血型大肠埃希菌O157:H7的流行病学 | 第20-21页 |
| 2 多聚磷酸盐激酶及多聚磷酸盐在细菌中的作用 | 第21-31页 |
| 3 Red同源重组技术的原理和应用 | 第31-34页 |
| 第一章 EHEC O157:H7 ppk基因缺失株与回补株的构建 | 第34-47页 |
| 1.1 材料 | 第34-36页 |
| 1.1.1 常用试剂与耗材 | 第34-35页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第35页 |
| 1.1.3 菌株与质粒 | 第35页 |
| 1.1.4 主要培养基和常用试剂的配制 | 第35-36页 |
| 1.2 方法 | 第36-41页 |
| 1.2.1 EHEC O157:H7 ppk基因的敲除 | 第36-39页 |
| 1.2.2 ppk基因回补株的构建 | 第39-41页 |
| 1.3 结果 | 第41-45页 |
| 1.3.1 获得带卡那抗性的DNA片段 | 第41-42页 |
| 1.3.2 EHEC O157:H7 EDL933w △ppk菌株的鉴定 | 第42-43页 |
| 1.3.3 缺失株的测序结果 | 第43-44页 |
| 1.3.4 回补株构建中回收片段的电泳结果 | 第44页 |
| 1.3.5 回补株的验证 | 第44-45页 |
| 1.4 讨论 | 第45-47页 |
| 第二章 EHEC O157:H7 ppk基因缺失株生物特性的初步研究 | 第47-52页 |
| 2.1 材料 | 第47-48页 |
| 2.1.1 常用试剂与耗材 | 第47页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第47页 |
| 2.1.3 菌株与细胞 | 第47页 |
| 2.1.4 主要培养基和常用试剂的配制 | 第47-48页 |
| 2.2 方法 | 第48-49页 |
| 2.2.1 染色镜捡 | 第48页 |
| 2.2.2 生长曲线的比较 | 第48页 |
| 2.2.3 细菌黏附实验 | 第48-49页 |
| 2.3 结果 | 第49-51页 |
| 2.3.1 形态结构的比较 | 第49页 |
| 2.3.2 生长能力的比较 | 第49-50页 |
| 2.3.3 两种菌株对Lovo细胞的黏附情况 | 第50-51页 |
| 2.4 讨论 | 第51-52页 |
| 第三章 PPK/polyP对EHEC O157:H7 EDL933菌株稳定调节基因rpoS及重要毒力基因stx1和stx2表达水平的影响 | 第52-62页 |
| 3.1 材料 | 第52-53页 |
| 3.1.1 常用试剂与耗材 | 第52-53页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第53页 |
| 3.1.3 菌株 | 第53页 |
| 3.2 方法 | 第53-55页 |
| 3.2.1 引物的设计与合成 | 第53页 |
| 3.2.2 样品RNA的提取 | 第53-54页 |
| 3.2.3 RNA中DNA的去除 | 第54页 |
| 3.2.4 RT-PCR反应 | 第54-55页 |
| 3.3 结果 | 第55-60页 |
| 3.3.1 ppk基因敲除对rpoS基因表达水平的影响 | 第55-57页 |
| 3.3.2 ppk基因敲除对stx1和stx2基因表达水平的影响 | 第57-60页 |
| 3.4 讨论 | 第60-62页 |
| 全文总结 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 附录 | 第70-71页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
