| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-28页 |
| ·引言 | 第12页 |
| ·黑素皮质素受体4 (MC4R) 的研究进展 | 第12-16页 |
| ·黑素皮质素受体家族的概况 | 第12-14页 |
| ·MC4R 基因的结构 | 第14-15页 |
| ·MC4R 调控动物采食量和能量平衡的机制 | 第15页 |
| ·MC4R 基因与经济性状的研究 | 第15-16页 |
| ·RNA 干扰技术的研究进展 | 第16-20页 |
| ·RNA 干扰技术历史回顾 | 第16-17页 |
| ·RNA 干扰的作用机制 | 第17-18页 |
| ·RNA 干扰技术在动物功能基因组研究中的应用 | 第18-20页 |
| ·深度测序技术的研究进展 | 第20-24页 |
| ·深度测序技术的发展历史 | 第20-21页 |
| ·高通量测序的原理 | 第21-23页 |
| ·高通量测序的应用 | 第23-24页 |
| ·SNP 芯片技术的研究进展 | 第24-27页 |
| ·SNP 芯片的种类及技术原理 | 第24-27页 |
| ·研究的目的和意义 | 第27-28页 |
| 第二章 MC4R 基因对胴体性状的影响 | 第28-45页 |
| ·材料 | 第28-31页 |
| ·试验群体 | 第28-29页 |
| ·主要试剂 | 第29-30页 |
| ·试剂配制 | 第30页 |
| ·主要仪器设备 | 第30-31页 |
| ·试验方法 | 第31-37页 |
| ·RNA 的提取和检测 | 第31-32页 |
| ·血液DNA 的提取和检测 | 第32-33页 |
| ·SNPs 筛查和实时荧光定量PCR 的引物设计 | 第33-35页 |
| ·PCR 反应体系和条件 | 第35-36页 |
| ·数据统计分析 | 第36-37页 |
| ·试验结果 | 第37-42页 |
| ·总RNA 提取结果 | 第37-38页 |
| ·DNA 提取结果 | 第38页 |
| ·牛MC4R 基因的遗传变异与胴体性状的关联分析 | 第38-40页 |
| ·背膘厚度低、高组生产性状的比较 | 第40页 |
| ·MC4R 基因的组织表达谱分析 | 第40-41页 |
| ·MC4R 基因表达水平分析 | 第41页 |
| ·MC4R 基因表达水平与背膘厚度的相关性分析 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-43页 |
| ·单核苷酸多态位点的搜寻 | 第42-43页 |
| ·MC4R 基因遗传效应对经济性状的影响 | 第43页 |
| ·MC4R 基因表达量与背膘厚度的关联分析 | 第43页 |
| ·小结 | 第43-45页 |
| 第三章 利用不同RNA 干扰技术靶向沉默MC4R 基因在牛成纤维细胞中的表达 | 第45-61页 |
| ·材料 | 第45-47页 |
| ·菌株、质粒与细胞 | 第45-46页 |
| ·主要试剂及配制 | 第46-47页 |
| ·主要仪器设备 | 第47页 |
| ·方法 | 第47-54页 |
| ·重组质粒的构建 | 第47-51页 |
| ·成纤维细胞的分离和培养 | 第51页 |
| ·慢病毒包装与滴度检测 | 第51-52页 |
| ·慢病毒颗粒转染牛成纤维细胞及MOI 值判定 | 第52-53页 |
| ·细胞中MC4R 基因干扰效果的Real-time PCR 分析 | 第53页 |
| ·细胞中MC4R 基因干扰效果的Western-blot 检测 | 第53-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-58页 |
| ·慢病毒表达载体pFU-GW-shMC4R 的构建结果 | 第54页 |
| ·慢病毒包装结果和MOI 值选择 | 第54-56页 |
| ·RNAi 效果的Real-time PCR 检测结果 | 第56-57页 |
| ·RNAi 效果的Western-blot 检测结果 | 第57页 |
| ·转染前后相关基因表达水平的变化 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-61页 |
| ·实时荧光定量内参基因的选择 | 第58-59页 |
| ·慢病毒介导的MC4R-RNAi | 第59-61页 |
| 第四章 深测序技术检测 MC4R-knockdown 对牛 成纤维细胞内各基因表达的影响 | 第61-94页 |
| ·材料 | 第61-62页 |
| ·细胞 | 第61页 |
| ·SNP 芯片数据供试群体 | 第61页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第61-62页 |
| ·主要仪器 | 第62页 |
| ·主要控制软件和生物信息学分析软件 | 第62页 |
| ·试验方法 | 第62-66页 |
| ·MC4R-knockdown 阳性细胞获得 | 第62页 |
| ·总RNA 提取及纯化 | 第62页 |
| ·RNA 样品的质量鉴定 | 第62-63页 |
| ·数字基因表达标签谱检测 | 第63页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第63-64页 |
| ·数据分析 | 第64-66页 |
| ·结果与分析 | 第66-89页 |
| ·各组RNA 纯化后总RNA 的检测结果 | 第66-67页 |
| ·测序Reads 质量评估与饱和度分析 | 第67-68页 |
| ·Reads 在参考基因上的分布统计 | 第68-70页 |
| ·试验重复性分析 | 第70页 |
| ·差异表达基因分析 | 第70-83页 |
| ·差异表达基因的通路分析 | 第83-85页 |
| ·深度测序结果的实时定量PCR 验证 | 第85-86页 |
| ·对差异表达基因的SNP 功能验证 | 第86-89页 |
| ·讨论 | 第89-94页 |
| ·高通量检测方法的选择 | 第89页 |
| ·测序方案的设计与结果比较 | 第89-90页 |
| ·MC4R-knockdown 引起牛成纤维细胞转录水平变化的分子机制探讨 | 第90-94页 |
| 结论 | 第94-95页 |
| 创新点 | 第95-96页 |
| 下一步研究展望 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-105页 |
| 缩略语表 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 作者简介 | 第107页 |
