| 摘要 | 第8-11页 |
| Astract | 第11-14页 |
| 缩略词 | 第15-16页 |
| 1 文献综述 | 第16-20页 |
| 1.1 甘蓝型油菜的起源 | 第16页 |
| 1.2 植物蜡质相关基因研究进展 | 第16-18页 |
| 1.3 实验研究意义 | 第18-20页 |
| 2 甘蓝型油菜BnCER7基因的生物信息学分析 | 第20-36页 |
| 2.1 实验方法和步骤 | 第20-21页 |
| 2.1.1 甘蓝型油菜BnCER7基因相关序列的收集 | 第20页 |
| 2.1.2 生物信息学分析 | 第20-21页 |
| 2.2 BnCER7基因的序列比对结果和分析 | 第21-34页 |
| 2.2.1 BnCER7基因序列分析 | 第21-22页 |
| 2.2.2 甘蓝型油菜BnCER7蛋白一级结构预测分析 | 第22-23页 |
| 2.2.3 甘蓝型油菜BnCER7蛋白二级和三级结构预测分析 | 第23-24页 |
| 2.2.4 甘蓝型油菜BnCER7跨膜区和信号肽预测 | 第24-26页 |
| 2.2.5 甘蓝型油菜BnCER7蛋白的功能结构域和亚细胞定位预测 | 第26-28页 |
| 2.2.6 甘蓝型油菜BnCER7蛋白功能预测 | 第28-29页 |
| 2.2.7 甘蓝型油菜BnCER7基因的启动子序列分析 | 第29-32页 |
| 2.2.8 甘蓝型油菜BnCER7基因编码蛋白进化树分析 | 第32-34页 |
| 2.3 讨论与小结 | 第34-36页 |
| 2.3.1 BnCER7蛋白一级二级三级结构生物信息学分析 | 第34页 |
| 2.3.2 BnCER7功能结构域和细胞定位的生物信息学分析 | 第34-35页 |
| 2.3.3 BnCER7进化树的生物信息学分析 | 第35页 |
| 2.3.4 BnCER7启动子结构的生物信息学分析 | 第35-36页 |
| 3 构建甘蓝型油菜BnCER7过表达载体及转化拟南芥 | 第36-54页 |
| 3.1 实验材料和试剂 | 第36-37页 |
| 3.1.1 植物材料和过表达载体 | 第36页 |
| 3.1.2 实验试剂和菌株 | 第36页 |
| 3.1.3 常用溶液的配制 | 第36-37页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-39页 |
| 3.2.1 目的基因BnCER7和载体的引物设计 | 第37-38页 |
| 3.2.2 甘蓝型油菜总RNA的提取 | 第38页 |
| 3.2.3 甘蓝型油菜单链cDNA的合成 | 第38页 |
| 3.2.4 甘蓝型油菜BnCER7全长CDS序列的扩增 | 第38-39页 |
| 3.3 目的基因过表达载体的构建 | 第39-42页 |
| 3.3.1 pCXSN载体质粒的提取 | 第40页 |
| 3.3.2 目的基因BnCER7连接pCXSN载体 | 第40-41页 |
| 3.3.3 目的基因转化大肠杆菌 | 第41页 |
| 3.3.4 重组质粒pCXSN的PCR鉴定 | 第41-42页 |
| 3.4 pCXSN::BnCER7-1转化拟南芥 | 第42-44页 |
| 3.4.1 过表达载体pCXSN::BnCER7-1冻融法转化农杆菌 | 第42页 |
| 3.4.2 含过表达载体的农杆菌用蘸花法转化拟南芥 | 第42页 |
| 3.4.3 转BnCER7拟南芥种子的消毒与筛选 | 第42页 |
| 3.4.4 转BnCER7拟南芥幼叶DNA的提取 | 第42-43页 |
| 3.4.5 扫描电镜观察 | 第43-44页 |
| 3.5 结果与分析 | 第44-51页 |
| 3.5.1 甘蓝型油菜总RNA的提取检测 | 第44-45页 |
| 3.5.2 甘蓝型油菜BnCER7-1全长的扩增 | 第45页 |
| 3.5.3 目的基因BnCER7-1过表达载体的连接与构建 | 第45-47页 |
| 3.5.4 转BnCER7拟南芥T0代的筛选 | 第47-48页 |
| 3.5.5 转BnCER7-1拟南芥T0代的检测及表型观察 | 第48页 |
| 3.5.6 转BnCER7-1拟南芥T1代的检测 | 第48-50页 |
| 3.5.7 过表达BnCER7-1拟南芥T2代表型观察 | 第50-51页 |
| 3.6 讨论和小结 | 第51-54页 |
| 3.6.1 甘蓝型油菜BnCER7-1的全长扩增与载体构建 | 第51-52页 |
| 3.6.2 转BnCER7拟南芥T1代植株的检测 | 第52页 |
| 3.6.3 过表达BnCER7-1基因拟南芥T2代表型观察 | 第52-54页 |
| 4 甘蓝型油菜BnCER7s基因超表达载体甘蓝型转化 | 第54-58页 |
| 4.1 实验材料 | 第54页 |
| 4.1.1 植物材料与试剂 | 第54页 |
| 4.1.2 油菜遗传转化实验所用培养基 | 第54页 |
| 4.2 过表达载体pCXSN::BnCER7-1转化甘蓝型油菜 | 第54-55页 |
| 4.2.1 制备含过表达BnCER7的农杆菌侵染液 | 第54-55页 |
| 4.2.2 甘蓝型油菜无菌苗和外植体下胚轴的制备 | 第55页 |
| 4.2.3 甘蓝型油菜外植体的转化目的基因 | 第55页 |
| 4.3 结果与分析 | 第55-56页 |
| 4.4 讨论与小结 | 第56-58页 |
| 5 甘蓝型油菜BnCER7组织、SA处理及胁迫表达分析 | 第58-65页 |
| 5.1 实验材料 | 第58页 |
| 5.1.1 植物材料与试剂 | 第58页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第58页 |
| 5.1.3 主要溶液配制 | 第58页 |
| 5.2 实验方法与步骤 | 第58-60页 |
| 5.2.1 甘蓝型油菜组织表达分析取材 | 第58页 |
| 5.2.2 SA激素和逆境胁迫处理 | 第58-59页 |
| 5.2.3 实时荧光定量PCR检测 | 第59-60页 |
| 5.3 结果与分析 | 第60-63页 |
| 5.3.1 甘蓝型油菜BnCER7基因组织表达模式分析 | 第60-61页 |
| 5.3.2 SA胁迫下BnCER7基因表达模式分析 | 第61页 |
| 5.3.3 高温胁迫下BnCER7基因表达模式分析 | 第61-62页 |
| 5.3.4 低温胁迫下BnCER7基因表达模式分析 | 第62-63页 |
| 5.4 讨论 | 第63-65页 |
| 6 总结与展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
