中文摘要 | 第9-11页 |
英文摘要 | 第11-13页 |
前言 | 第14-17页 |
第一部分 核心岩藻糖基化在DP胸腺细胞中明显增多 | 第17-22页 |
材料和方法 | 第17-20页 |
1. 实验材料 | 第17-18页 |
1.1 实验对象 | 第17页 |
1.2 主要试剂 | 第17-18页 |
1.3 主要仪器 | 第18页 |
2. 实验方法 | 第18-20页 |
2.1 胸腺单细胞悬液的制备 | 第18-19页 |
2.2 不同发育阶段的细胞分选 | 第19页 |
2.3 细胞计数 | 第19页 |
2.4 细胞表面凝集素染色 | 第19-20页 |
结果 | 第20-21页 |
1.核心岩藻糖基化在整个胸腺细胞分化过程中的动态变化 | 第20-21页 |
2.Fut8~(-/-)胸腺细胞表面的核心岩藻糖基化 | 第21页 |
讨论与结论 | 第21-22页 |
第二部分 Fut8 基因缺失导致DP胸腺细胞数目的显著减少 | 第22-33页 |
材料和方法 | 第22-29页 |
1. 实验材料 | 第22-25页 |
1.1 实验对象 | 第22页 |
1.2 主要试剂 | 第22页 |
1.3 主要仪器 | 第22-23页 |
1.4 相关试剂配制 | 第23-25页 |
2. 实验方法 | 第25-29页 |
2.1 免疫组化 | 第25页 |
2.2 细胞全蛋白的提取及浓度测定 | 第25-26页 |
2.3 蛋白免疫印迹 | 第26-27页 |
2.4 细胞流式分析 | 第27页 |
2.5 mRNA的提取及反转 | 第27-28页 |
2.6 荧光实时定量PCR | 第28-29页 |
结果 | 第29-32页 |
1. Fut8~(-/-)小鼠显示胸腺发育异常 | 第29-30页 |
2. Fut8~(-/-)小鼠胸腺中DP胸腺细胞减少 | 第30-31页 |
3. Fut8~(-/-)DN细胞中DN4 阶段的细胞数目减少 | 第31-32页 |
讨论 | 第32页 |
结论 | 第32-33页 |
第三部分 TCR核心岩藻糖基化缺失导致DP胸腺细胞增殖能力下降 | 第33-43页 |
材料和方法 | 第33-37页 |
1. 实验材料 | 第33-34页 |
1.1 实验对象 | 第33页 |
1.2 主要试剂 | 第33-34页 |
1.3 主要仪器 | 第34页 |
1.4 相关试剂配制 | 第34页 |
2. 实验方法 | 第34-37页 |
2.1 流式细胞染色 | 第34-35页 |
2.2 高效液相色谱层析 | 第35页 |
2.3 免疫沉淀 | 第35页 |
2.4 细胞的磷酸化处理 | 第35页 |
2.5 细胞表面蛋白酶切实验 | 第35-36页 |
2.6 荧光实时定量PCR的检测 | 第36页 |
2.7 增殖实验 | 第36-37页 |
2.8 细胞团的计数 | 第37页 |
2.9 细胞凋亡的检测 | 第37页 |
结果 | 第37-42页 |
1. Fut8~(-/-) DP胸腺细胞TCR的核心岩藻糖基化缺失 | 第37-38页 |
2. Fut8~(-/-) DP胸腺细胞TCR上的核心岩藻糖基化的缺失导致其信号转导能力弱 | 第38-40页 |
3. 核心岩藻糖基化的缺失导致Fut8~(-/-) DP细胞增殖能力下降 | 第40-42页 |
讨论 | 第42页 |
结论 | 第42-43页 |
总结 | 第43-44页 |
参考文献 | 第44-48页 |
综述 | 第48-57页 |
参考文献 | 第52-57页 |
攻读硕士期间发表论文情况 | 第57-58页 |
致谢 | 第58-59页 |