| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 引言 | 第10-26页 |
| 1.1 VEGF_(165)的研究进展 | 第10-14页 |
| 1.1.1 VEGF_(165)的结构及特性 | 第10-11页 |
| 1.1.2 VEGF_(165)的信号通路 | 第11页 |
| 1.1.3 VEGF_(165)的生物学功能 | 第11-12页 |
| 1.1.4 VEGF_(165)的促血管生成机制 | 第12-13页 |
| 1.1.5 VEGF_(165)与肿瘤的关系 | 第13页 |
| 1.1.6 以 VEGF 和 VEGFR 为靶点抗肿瘤血管治疗 | 第13-14页 |
| 1.2 适体的研究进展 | 第14-24页 |
| 1.2.1 核酸适体的优势 | 第15-16页 |
| 1.2.2 SELEX 技术基本流程与分类 | 第16-20页 |
| 1.2.3 适体检测方面的应用 | 第20-24页 |
| 1.3 课题选题依据 | 第24-26页 |
| 第2章 点杂交和 Eastern blotting 法检测蛋白 | 第26-37页 |
| 2.1 实验材料、试剂及仪器 | 第26-28页 |
| 2.1.1 主要实验试剂 | 第26页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.3 主要试剂的配制 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-31页 |
| 2.2.1 点杂交验证生物素和链霉亲和素的结合 | 第28页 |
| 2.2.2 点杂交以抗体检测非还原 VEGF_(165)蛋白 | 第28-29页 |
| 2.2.3 点杂交以适体检测非还原 VEGF_(165)蛋白 | 第29-30页 |
| 2.2.4 Western blotting 以抗体检测还原 VEGF_(165)蛋白 | 第30页 |
| 2.2.5 Eastern blotting 以适体检测还原 VEGF_(165)蛋白 | 第30-31页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第31-35页 |
| 2.3.1 点杂交验证生物素和链霉亲和素的结合 | 第31-32页 |
| 2.3.2 点杂交以抗体检测非还原 VEGF_(165)蛋白 | 第32页 |
| 2.3.3 点杂交以适体检测非还原 VEGF_(165)蛋白 | 第32-34页 |
| 2.3.4 Western blotting 以抗体检测还原 VEGF_(165)蛋白 | 第34页 |
| 2.3.5 Eastern blotting 以适体检测还原 VEGF_(165)蛋白 | 第34-35页 |
| 2.4 小结 | 第35-37页 |
| 第3章 优化酶切保护检测蛋白的方法 | 第37-45页 |
| 3.1 实验材料、试剂及仪器 | 第37-38页 |
| 3.1.1 主要实验试剂 | 第37页 |
| 3.1.2 主要实验仪器 | 第37-38页 |
| 3.1.3 主要试剂的配制 | 第38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-41页 |
| 3.2.1 优化 50bp marker 的电泳条件 | 第38页 |
| 3.2.2 Real-time PCR 优化适体扩增循环次数 | 第38-39页 |
| 3.2.3 优化酶切产物扩增的 PCR 体系 | 第39-40页 |
| 3.2.4 优化酶切过程中 DNase I 的用量 | 第40-41页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第41-44页 |
| 3.3.1 优化 50bp marker 的电泳条件 | 第41-42页 |
| 3.3.2 Real-time PCR 检测适体扩增过程 | 第42-43页 |
| 3.3.3 优化酶切产物扩增的 PCR 体系 | 第43页 |
| 3.3.4 优化酶切过程中 DNase I 的用量 | 第43-44页 |
| 3.4 小结 | 第44-45页 |
| 第4章 ARP-PCR 法的可行性验证 | 第45-53页 |
| 4.1 实验材料、试剂及仪器 | 第45页 |
| 4.1.1 主要实验试剂 | 第45页 |
| 4.1.2 主要实验仪器 | 第45页 |
| 4.1.3 主要试剂的配制 | 第45页 |
| 4.2 实验方法 | 第45-50页 |
| 4.2.1 普通 PCR 验证引物可行性 | 第45-48页 |
| 4.2.2 未加蛋白下 DNase I 的酶切情况 | 第48页 |
| 4.2.3 加蛋白下 DNase I 的酶切情况 | 第48-49页 |
| 4.2.4 ARP-PCR 法特异性检测 | 第49-50页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第50-52页 |
| 4.3.1 普通 PCR 验证引物可行性 | 第50页 |
| 4.3.2 未加蛋白下 DNase I 的酶切情况 | 第50-51页 |
| 4.3.3 加蛋白下 DNase I 的酶切情况 | 第51页 |
| 4.3.4 ARP-PCR 法特异性检测 | 第51-52页 |
| 4.4 小结 | 第52-53页 |
| 第5章 利用 Exo I 的酶切检测 | 第53-59页 |
| 5.1 实验材料、试剂及仪器 | 第53页 |
| 5.1.1 主要实验试剂 | 第53页 |
| 5.1.2 主要实验仪器 | 第53页 |
| 5.1.3 主要试剂的配制 | 第53页 |
| 5.2 实验方法 | 第53-55页 |
| 5.2.1 未加蛋白下 Exo I 的酶切情况 | 第53-54页 |
| 5.2.2 变构作用和缓冲液对酶切的影响 | 第54-55页 |
| 5.2.3 Exo I 的用量对酶切的影响 | 第55页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第55-57页 |
| 5.3.1 未加蛋白下 Exo I 的酶切情况 | 第55-56页 |
| 5.3.2 变构作用和缓冲液对酶切的影响 | 第56-57页 |
| 5.3.3 Exo I 的用量对酶切的影响 | 第57页 |
| 5.4 小结 | 第57-59页 |
| 第6章 总结 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 致谢 | 第69-71页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第71页 |
