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草鱼IL-8基因在炎症反应中的功能研究

中文摘要第4-6页
Abstract第6-7页
前言第12-14页
文献综述第14-24页
    1 IL-8 的发现与产生第14-15页
        1.1 IL-8 的发现第14页
        1.2 IL-8 的产生第14-15页
    2 IL-8 基因结构、表达及调节第15-16页
        2.1 IL-8 基因结构第15页
        2.2 IL-8 表达与调节第15-16页
    3 IL-8 受体及 IL-8 作用机理第16-18页
        3.1 IL-8 受体第16页
        3.2 IL-8 作用机理第16-18页
    4 IL-8 的生物学活性及其在疾病中的作用第18-20页
        4.1 IL-8 的生物学活性第18页
        4.2 IL-8 与疾病第18-20页
    5 鱼类 IL-8 研究进展第20-23页
        5.1 鱼类 IL-8 的产生第20页
        5.2 鱼类 IL-8 基因结构第20-22页
        5.3 鱼类 IL-8 受体第22页
        5.4 鱼类 IL-8 功能研究第22-23页
    6 本研究目的意义第23-24页
第一章 草鱼重组 IL-8 生物学活性研究第24-49页
    第一节 草鱼重组 IL-8 对草鱼头肾中性粒细胞的趋化作用第24-39页
        1 材料第24-27页
            1.1 实验动物第24页
            1.2 草鱼 IL-8 重组蛋白(rgcIL-8),Trx 蛋白表达体系第24页
            1.3 主要试剂及耗材第24-25页
            1.4 主要仪器第25-26页
            1.5 实验主要相关试剂的配置第26-27页
        2 方法第27-32页
            2.1 rgcIL-8 的 Ni-NTA 亲和层析纯化第27-30页
            2.2 Trx 可溶性蛋白的 Ni-NTA 亲和层析纯化第30-31页
            2.3 草鱼头肾细胞的获得第31页
            2.4 rgcIL-8 对草鱼头肾细胞的趋化作用第31-32页
            2.5 数据分析第32页
        3 结果第32-37页
            3.1 rgcIL-8 及 trx 蛋白的可溶性分析第32-33页
            3.2 纯化后 rgcIL-8、trx 蛋白的浓度及纯度分析第33-35页
            3.3 rgcIL-8 对草鱼头肾细胞的趋化活性第35-37页
        4 讨论第37-39页
    第二节 草鱼重组 IL-8 蛋白的促炎作用第39-49页
        1 材料第39-40页
            1.1 实验动物第39页
            1.2 纯化的 rgcIL-8,Trx 蛋白第39页
            1.3 主要试剂及耗材第39页
            1.4 主要仪器第39页
            1.5 实验主要相关试剂的配置第39-40页
        2 方法第40-43页
            2.1 肌肉注射重组 IL-8 蛋白第40-41页
            2.2 组织采集第41页
            2.3 石蜡切片的制作第41-42页
            2.4 结果分析第42-43页
        3 结果第43-47页
        4 讨论第47-49页
第二章 草鱼重组 IL-8 蛋白多克隆抗体的制备第49-63页
    1 材料第49-51页
        1.1 实验动物第49页
        1.2 菌株第49页
        1.3 主要试剂及耗材第49-50页
        1.4 主要仪器第50页
        1.5 实验主要相关试剂的配置第50-51页
    2 方法第51-56页
        2.1 抗原的制备第51-52页
        2.2 带有 pET32a+ 载体的 BL21 菌体总蛋白的提取第52页
        2.3 免疫 BALB/c 小鼠第52-53页
        2.4 抗血清的收集第53页
        2.5 双向免疫扩散实验检测抗体第53页
        2.6 Western blot 检测抗体特异性第53-54页
        2.7 间接 ELISA 检测抗体的效价第54-55页
        2.8 间接 ELISA 检测草鱼 IL-8 蛋白方法的建立第55-56页
    3 结果第56-61页
        3.1 rgcIL-8 的纯化和鉴定第56-57页
        3.2 双向免疫扩散实验检测抗体第57-58页
        3.3 多克隆抗体的 Western blot 测定第58-59页
        3.4 多克隆抗体效价的测定第59-60页
        3.5 间接 ELISA 方法的建立第60-61页
    4 讨论第61-63页
第三章 草鱼免疫相关组织 IL-8 蛋白的表达及其在炎症过程中的作用第63-72页
    1 材料第63-64页
        1.1 实验动物第63页
        1.2 主要试剂及耗材第63页
        1.3 主要仪器第63-64页
        1.4 实验主要相关试剂的配置第64页
    2 方法第64-65页
        2.1 草鱼各组织单细胞悬液的获得第64-65页
        2.2 荧光免疫检测第65页
        2.3 数据分析第65页
    3 结果第65-69页
        3.1 草鱼组织中相关细胞的集群分布第65-66页
        3.2 草鱼各组织中 IL-8 表达差异第66-69页
            3.2.1 正常生理状态下草鱼各组织中 IL-8 表达差异第68-69页
            3.2.2 LPS 诱导后草鱼相关组织中 IL-8 表达量的变化第69页
    4 讨论第69-72页
全文结论第72-73页
参考文献第73-84页
攻读学位期间本人公开发表的论著、论文第84-85页
致谢第85-86页

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