| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第14-20页 |
| 1.1 黏膜疫苗的研究 | 第14页 |
| 1.2 乳酸菌作为黏膜疫苗递送载体研究 | 第14-16页 |
| 1.2.1 乳酸菌作为黏膜疫苗递送载体的可行性 | 第14-15页 |
| 1.2.2 乳酸菌作为黏膜疫苗递送载体的优势 | 第15-16页 |
| 1.2.3 嗜酸乳杆菌作为黏膜疫苗递送载体的研究 | 第16页 |
| 1.3 乳酸菌表面展示系统 | 第16-18页 |
| 1.3.1 乳酸菌表面展示外源抗原 | 第16-17页 |
| 1.3.2 表面蛋白锚定结构域 | 第17页 |
| 1.3.3 新型乳酸菌表面展示方法 | 第17-18页 |
| 1.4 禽流感病毒黏膜亚单位疫苗的研究 | 第18-19页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 嗜酸乳杆菌表面展示方法的建立 | 第20-28页 |
| 摘要 | 第20页 |
| 2.1 材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 主要仪器和试剂 | 第20-21页 |
| 2.2 方法 | 第21-22页 |
| 2.2.1 菌株基因组的提取 | 第21页 |
| 2.2.2 引物设计和合成 | 第21页 |
| 2.2.3 重组质粒载体的构建 | 第21-22页 |
| 2.2.4 融合蛋白的表达 | 第22页 |
| 2.2.5 融合蛋白的SDS-PAGE检测和western blot分析 | 第22页 |
| 2.2.6 结合反应 | 第22页 |
| 2.2.7 荧光显微镜检测 | 第22页 |
| 2.3 结果 | 第22-25页 |
| 2.3.1 目的基因扩增结果 | 第22-23页 |
| 2.3.2 重组质粒鉴定 | 第23-24页 |
| 2.3.3 融合蛋白的鉴定结果 | 第24页 |
| 2.3.4 锚定结合结果 | 第24-25页 |
| 2.4 讨论 | 第25-28页 |
| 第三章 嗜酸乳杆菌表面锚定展示原核表达的禽流感病毒血凝素HA1 | 第28-37页 |
| 摘要 | 第28页 |
| 3.1 材料 | 第28页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第28页 |
| 3.1.2 主要仪器和试剂 | 第28页 |
| 3.2 方法 | 第28-31页 |
| 3.2.1 引物设计和HA1基因优化 | 第28-29页 |
| 3.2.2 重组质粒的构建 | 第29页 |
| 3.2.3 融合蛋白的表达纯化 | 第29-30页 |
| 3.2.4 结合反应 | 第30页 |
| 3.2.4.1 融合蛋白HA1-Slap与嗜酸乳杆菌锚定结合 | 第30页 |
| 3.2.4.2 融合蛋HA1-AcmA与嗜酸乳杆菌锚定结合 | 第30页 |
| 3.2.5 SDS-PAGE检测及western blot分析 | 第30页 |
| 3.2.6 间接免疫荧光试验(IFA) | 第30-31页 |
| 3.2.7 血凝试验 | 第31页 |
| 3.2.8 蛋白锚定结合量测定 | 第31页 |
| 3.2.9 锚定结合稳定性分析 | 第31页 |
| 3.3 结果 | 第31-35页 |
| 3.3.1 表达重组质粒的构建及鉴定 | 第31-32页 |
| 3.3.2 融合蛋白HA1-Slap和HA1-AcmA的表达 | 第32页 |
| 3.3.3 嗜酸乳杆菌表面展示融合蛋白的鉴定 | 第32-34页 |
| 3.3.3.1 SDS-PAGE和western blot鉴定结果 | 第32-33页 |
| 3.3.3.2 间接免疫荧光(IFA)鉴定结果 | 第33-34页 |
| 3.3.4 蛋白锚定结合量 | 第34页 |
| 3.3.5 稳定性分析结果 | 第34-35页 |
| 3.3.6 HA试验结果 | 第35页 |
| 3.4 讨论 | 第35-37页 |
| 第四章 嗜酸乳杆菌表面展示真核表达的禽流感血凝素HA1 | 第37-47页 |
| 摘要 | 第37页 |
| 4.1 材料 | 第37页 |
| 4.1.1 菌株、细胞和质粒 | 第37页 |
| 4.1.2 主要仪器和试剂 | 第37页 |
| 4.2 方法 | 第37-40页 |
| 4.2.1 重组杆状病毒的构建 | 第37-39页 |
| 4.2.1.1 引物设计与目的基因扩增 | 第37-38页 |
| 4.2.1.2 重组转移质粒的构建 | 第38页 |
| 4.2.1.3 重组杆粒的构建 | 第38页 |
| 4.2.1.4 重组杆状病毒的制备 | 第38-39页 |
| 4.2.3 融合蛋白的表达及鉴定 | 第39页 |
| 4.2.3.1 间接免疫荧光试验 | 第39页 |
| 4.2.3.2 Western blot试验 | 第39页 |
| 4.2.3.3 融合蛋白纯化 | 第39页 |
| 4.2.5 结合反应 | 第39页 |
| 4.2.6 嗜酸乳杆菌细胞壁表面融合蛋白检测 | 第39-40页 |
| 4.2.6.1 间接免疫荧光试验(IFA) | 第39-40页 |
| 4.2.6.2 SDS-PAGE和western blot分析 | 第40页 |
| 4.2.7 血凝试验 | 第40页 |
| 4.2.8 蛋白锚定结合量测定 | 第40页 |
| 4.3 结果 | 第40-45页 |
| 4.3.1 重组转移质粒的构建与鉴定 | 第40-41页 |
| 4.3.2 重组杆粒的鉴定 | 第41页 |
| 4.3.3 融合蛋白表达鉴定 | 第41-43页 |
| 4.3.3.1 IFA鉴定结果 | 第41-42页 |
| 4.3.3.2 western blot鉴定结果 | 第42-43页 |
| 4.3.4 融合蛋白锚定到细胞壁鉴定 | 第43-44页 |
| 4.3.4.1 IFA鉴定结果 | 第43页 |
| 4.3.4.2 SDS-PAGE分析和westernblot鉴定结果 | 第43-44页 |
| 4.3.5 血凝试验结果 | 第44-45页 |
| 4.3.6 锚定结合量和稳定性检测 | 第45页 |
| 4.4 讨论 | 第45-47页 |
| 第五章 全文结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简历 | 第55页 |
