| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 符号说明 | 第11-13页 |
| 第一章 综述 | 第13-21页 |
| 一、宿主对抗病毒策略之一——细胞凋亡 | 第13-14页 |
| 二、细胞凋亡的调控研究 | 第14-17页 |
| 1. 哺乳动物细胞凋亡调控的研究 | 第14-15页 |
| 2. 无脊椎动物果蝇和鳞翅目昆虫细胞凋亡调控的研究 | 第15-17页 |
| 三、p53在细胞凋亡中的作用研究概述 | 第17-20页 |
| 1. 哺乳动物p53基因研究概述 | 第17-18页 |
| 2. 昆虫p53基因研究概述 | 第18-20页 |
| 2.1 果蝇p53基因研究概述 | 第18-19页 |
| 2.2 鳞翅目p53基因研究概述 | 第19-20页 |
| 四、昆虫杆状病毒简述 | 第20页 |
| 五、存在的科学问题及研究意义 | 第20-21页 |
| 第二章 棉铃虫p53基因克隆及抗病毒作用研究 | 第21-51页 |
| 一、引言 | 第21-22页 |
| 二、材料和方法 | 第22-34页 |
| 1. 材料 | 第22-23页 |
| 1.1 昆虫、细胞和病毒 | 第22页 |
| 1.2 实验试剂和仪器 | 第22-23页 |
| 2. 实验方法 | 第23-34页 |
| 2.1 病毒感染体外细胞系 | 第23页 |
| 2.2 RNA提取、cDNA合成 | 第23-24页 |
| 2.3 半定量RT-PCR和实时定量PCR(Q-PCR) | 第24-25页 |
| 2.4 p53基因克隆和序列分析 | 第25页 |
| 2.5 P53重组表达和抗体制备 | 第25-30页 |
| 2.5.1 构建T-p53-ORF全长质粒 | 第25-27页 |
| 2.5.2 构建重组表达质粒pET-30a-p53-C端 | 第27-28页 |
| 2.5.3 构建表达菌株和试表达 | 第28页 |
| 2.5.4 大规模培养和蛋白纯化 | 第28-29页 |
| 2.5.5 多克隆抗体的制备 | 第29-30页 |
| 2.6 棉铃虫表皮细胞系中过表达p53 | 第30-31页 |
| 2.6.1 构建p53的过表达质粒 | 第30页 |
| 2.6.2 重组质粒pIEx-4-p53-RFP转染表皮细胞系 | 第30-31页 |
| 2.7 RNA干扰 | 第31-33页 |
| 2.7.1 制备DNA模板 | 第31-32页 |
| 2.7.2 合成dsRNA | 第32页 |
| 2.7.3 dsRNA转染表皮细胞系进行基因干扰 | 第32-33页 |
| 2.8 病毒定量 | 第33-34页 |
| 2.8.1 病毒定量标准曲线制备 | 第33页 |
| 2.8.2 病毒DNA提取及定量 | 第33-34页 |
| 2.9 MTT法检测细胞活力 | 第34页 |
| 三、实验结果 | 第34-46页 |
| 1. 棉铃虫表皮细胞系HaEpi以凋亡对抗病毒AcMNPV的感染复制 | 第34-36页 |
| 2. 宿主凋亡基因被病毒诱导上调 | 第36页 |
| 3. 棉铃虫p53基因克隆及鉴定 | 第36-37页 |
| 4. P53在不同物种中变异较大 | 第37-39页 |
| 5. p53组织分布及病毒刺激后p53在体内体外的表达模式 | 第39-41页 |
| 6. p53过表达可以促细胞凋亡 | 第41-42页 |
| 7. 干扰p53不能抑制AcMNPV诱导的表皮细胞凋亡 | 第42-44页 |
| 8. 过表达p53抑制AcMNPV病毒的复制 | 第44-45页 |
| 9. 过表达p53提高了HaEpi细胞被AcMNPV感染后的存活率 | 第45-46页 |
| 四、讨论 | 第46-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 论文创新点总结 | 第55-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 学位论文评闽及答辩情况表 | 第58页 |
