| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 文献综述 | 第11-18页 |
| 一、铁蛋白轻链研究进展 | 第11-13页 |
| 1 铁在人体的主要功能 | 第11页 |
| 2 FTL的分子结构及其主要功能 | 第11-12页 |
| 3 FTL参与炎症反应 | 第12-13页 |
| 二 MAPK和NF-κB信号转导通路研究进展 | 第13-16页 |
| 1 MAPK和NF-κB信号转导通路 | 第13-15页 |
| 2 MAPK和NF-κB信号转导通路调控炎症反应 | 第15-16页 |
| 三 RNA干扰技术及应用 | 第16-18页 |
| 引言 | 第18-19页 |
| 第一部分 FTL-shRNA表达载体的构建与稳定表达细胞株的筛选 | 第19-27页 |
| 1 材料与试剂 | 第19-20页 |
| 1.1 实验材料 | 第19页 |
| 1.2 主要实验试剂 | 第19-20页 |
| 2 实验方法 | 第20-24页 |
| 2.1 短发夹式小干扰RNA(shRNA)的设计与构建 | 第20-21页 |
| 2.2 细胞培养 | 第21页 |
| 2.3 FTL-shRNA稳定表达细胞株筛选 | 第21-22页 |
| 2.4 Western Blot检测蛋白表达 | 第22-24页 |
| 3 结果 | 第24-25页 |
| 3.1 瞬时转染后四对FTL-shRNA的干扰效果 | 第24-25页 |
| 3.2 稳定表达FTL-shRNA细胞株的鉴定 | 第25页 |
| 4 讨论 | 第25-26页 |
| 5 小结 | 第26-27页 |
| 第二部分 干扰FTL的表达对LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应的影响 | 第27-43页 |
| 1 材料与试剂 | 第27-28页 |
| 1.1 实验材料 | 第27页 |
| 1.2 主要实验试剂 | 第27-28页 |
| 2 实验方法 | 第28-33页 |
| 2.1 细胞培养及处理 | 第28页 |
| 2.2 RT-PCR检测mRNA表达 | 第28-31页 |
| 2.3 ELISA检测TNF-α和IL-1β蛋白释放量(按试剂盒说明操作) | 第31页 |
| 2.4 Western Blot检测蛋白表达 | 第31-32页 |
| 2.5 酶法检测NO释放量(按试剂盒说明操作) | 第32页 |
| 2.6 ELISA检测PGE2蛋白释放量(按试剂盒说明操作) | 第32-33页 |
| 2.7 数据统计分析 | 第33页 |
| 3 结果 | 第33-42页 |
| 3.1 干扰FTL表达对LPS诱导的TNF-α和IL-1β mRNA水平的影响 | 第33-35页 |
| 3.2 干扰FTL表达对LPS诱导的TNF-α和IL-1β释放量的影响 | 第35-37页 |
| 3.3 干扰FTL表达对LPS诱导的iNOS和COX2 mRNA水平的影响 | 第37-38页 |
| 3.4 干扰FTL表达对LPS诱导的iNOS和COX-2蛋白水平的影响 | 第38-40页 |
| 3.5 干扰FTL表达对LPS诱导的NO和PGE2释放量的影响 | 第40-42页 |
| 4 讨论 | 第42页 |
| 5 小结 | 第42-43页 |
| 第三部分 干扰FTL表达影响LPS诱导RAW264.7炎症反应的机制 | 第43-50页 |
| 1 材料与试剂 | 第43页 |
| 1.1 实验材料 | 第43页 |
| 1.2 主要实验试剂 | 第43页 |
| 2 实验方法 | 第43-44页 |
| 2.1 细胞培养及处理 | 第43-44页 |
| 2.2 Western Blot检测蛋白表达 | 第44页 |
| 2.3 数据统计分析 | 第44页 |
| 3 结果 | 第44-48页 |
| 3.1 干扰FTL表达对LPS诱导的ERK、JNK信号通路的影响 | 第44-46页 |
| 3.2 干扰FTL表达对LPS诱导激活的NF-κB信号通路的影响 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-49页 |
| 5 小结 | 第49-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 附录 | 第57-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 个人简历 | 第60页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果清单 | 第60页 |
