| 摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一章 前言 | 第15-35页 |
| 1 细菌感染与疾病 | 第15-21页 |
| 1.1 细菌感染 | 第15-17页 |
| 1.2 金黄色葡萄球菌感染 | 第17-19页 |
| 1.3 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染 | 第19-21页 |
| 2 抗菌肽研究进展 | 第21-34页 |
| 2.1 抗菌肽概述 | 第21-23页 |
| 2.2 抗菌肽的作用机制 | 第23-29页 |
| 2.2.1 攻膜抗菌肽的抗菌机制 | 第24-26页 |
| 2.2.1.1 木桶板模式 | 第25页 |
| 2.2.1.2 环形孔模式 | 第25页 |
| 2.2.1.3 地毯模式 | 第25-26页 |
| 2.2.1.4 聚集模式 | 第26页 |
| 2.2.2 非攻膜抗菌肽的抗菌机制 | 第26-29页 |
| 2.2.2.1 抗菌肽与核酸作用 | 第26-27页 |
| 2.2.2.2 抗菌肽抑制蛋白合成 | 第27-28页 |
| 2.2.2.3 抗菌肽抑制蛋白折叠 | 第28页 |
| 2.2.2.4 抗菌肽干扰细胞壁合成/细胞分裂/隔膜形成 | 第28-29页 |
| 2.3 抗菌肽药物开发 | 第29-34页 |
| 2.3.1 抗微生物多肽开发 | 第32-33页 |
| 2.3.2 免疫调节多肽开发 | 第33-34页 |
| 3 本工作的出发点 | 第34-35页 |
| 第二章 蝎活性多肽BmKn2的分离与鉴定 | 第35-48页 |
| 1 引言 | 第35-36页 |
| 2. 材料和方法 | 第36-38页 |
| 2.1 材料 | 第36页 |
| 2.1.1 组织材料及cDNA文库 | 第36页 |
| 2.1.2 主要试剂与仪器 | 第36页 |
| 2.1.3 溶液配制 | 第36页 |
| 2.2 方法 | 第36-38页 |
| 2.2.1 BmKn2 cDNA序列的分离鉴定和比对 | 第36-37页 |
| 2.2.2 蝎毒素抗菌肽BmKn2的化学合成及纯度鉴定 | 第37页 |
| 2.2.3 BmKn2二级结构分析 | 第37页 |
| 2.2.4 马氏正钳蝎毒液收集 | 第37页 |
| 2.2.5 蝎活性肽BmKn2的蛋白水平鉴定 | 第37-38页 |
| 3 结果 | 第38-46页 |
| 3.1 BmKn2 cDNA序列分析 | 第38-39页 |
| 3.2 BmKn2的化学合成及纯度鉴定 | 第39-40页 |
| 3.3 BmKn2的二级结构预测分析 | 第40-41页 |
| 3.4 BmKn2的蛋白水平鉴定 | 第41-46页 |
| 3.4.1 合成BmKn2外标的出峰时间 | 第41-42页 |
| 3.4.2 马氏正钳蝎粗毒HPLC鉴定 | 第42-43页 |
| 3.4.3 质谱鉴定 | 第43-46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 蝎活性肽BmKn2的抗菌功能研究 | 第48-62页 |
| 1 引言 | 第48-49页 |
| 2. 材料和方法 | 第49-53页 |
| 2.1 材料 | 第49-50页 |
| 2.1.1 菌株、实验动物 | 第49页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第49页 |
| 2.1.3 溶液配制 | 第49-50页 |
| 2.2 方法 | 第50-53页 |
| 2.2.1 蝎活性肽BmKn2的体外抑菌功能鉴定 | 第50-52页 |
| 2.2.1.1 BmKn2对标准菌株的抑菌圈分析 | 第50页 |
| 2.2.1.2 BmKn2对标准菌株的最小抑制浓度分析 | 第50页 |
| 2.2.1.3 BmKn2抑制标准菌株生长实验 | 第50-51页 |
| 2.2.1.4 BmKn2对临床分离耐药菌株的最小抑制浓度分析 | 第51页 |
| 2.2.1.5 BmKn2抑制抗生素耐受菌株生长实验 | 第51-52页 |
| 2.2.2 BmKn2体内抗菌活性测定 | 第52-53页 |
| 2.2.2.1 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染菌液制备 | 第52页 |
| 2.2.2.2 建立MRSA感染的小鼠腹膜炎模型 | 第52页 |
| 2.2.2.3 BmKn2治疗实验 | 第52页 |
| 2.2.2.4 BmKn2体内治疗效果分析 | 第52-53页 |
| 3 结果 | 第53-60页 |
| 3.1 蝎活性肽BmKn2的体外抑菌功能 | 第53-57页 |
| 3.1.1 BmKn2对标准菌株的抑菌圈效应 | 第53-54页 |
| 3.1.2 BmKn2对标准菌株的最小抑菌浓度 | 第54-55页 |
| 3.1.3 BmKn2对耐药菌株的最小抑菌浓度 | 第55-56页 |
| 3.1.4 BmKn2抑制标准和耐药菌株的生长 | 第56-57页 |
| 3.2 蝎活性肽BmKn2的体内抑菌功能 | 第57-60页 |
| 3.2.1 小鼠腹膜炎模型的建立 | 第57-58页 |
| 3.2.2 BmKn2对MRSA感染小鼠的治愈效应 | 第58-59页 |
| 3.2.3 BmKn2对MRSA的体内抗菌效应 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-62页 |
| 第四章 蝎活性抗菌多肽BmKn2的分子改造 | 第62-70页 |
| 1 引言 | 第62页 |
| 2. 材料和方法 | 第62-64页 |
| 2.1 材料 | 第62-63页 |
| 2.1.1 菌株 | 第62-63页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第63页 |
| 2.1.3 溶液配制 | 第63页 |
| 2.2 方法 | 第63-64页 |
| 2.2.1 BmKn2及其突变体序列分析 | 第63页 |
| 2.2.2 BmKn2及其突变体抗菌活性筛选 | 第63-64页 |
| 2.2.3 溶血实验 | 第64页 |
| 3 结果 | 第64-68页 |
| 3.1 BmKn2分子设计与改造 | 第64-65页 |
| 3.2 BmKn2及其突变体二级结构预测分析 | 第65-66页 |
| 3.3 BmKn2及其突变体抗菌活性筛选 | 第66-67页 |
| 3.4 突变体Kn2-7与野生型BmKn2的溶血活性 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-70页 |
| 第五章 突变体Kn2-7多肽的抗菌功能研究 | 第70-85页 |
| 1. 引言 | 第70-71页 |
| 2. 材料和方法 | 第71-75页 |
| 2.1 材料 | 第71-72页 |
| 2.1.1 菌株、实验动物 | 第71页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第71页 |
| 2.1.3 溶液配制 | 第71-72页 |
| 2.2 方法 | 第72-75页 |
| 2.2.1 突变体Kn2-7多肽的体外抑菌功能鉴定 | 第72-73页 |
| 2.2.1.1 Kn2-7对标准菌株最小抑制浓度的测定 | 第72页 |
| 2.2.1.2 Kn2-7抑制标准菌株生长实验 | 第72-73页 |
| 2.2.1.3 Kn2-7对临床分离的耐药菌株MIC的测定 | 第73页 |
| 2.2.1.4 Kn2-7抑制耐药菌株的生长实验 | 第73页 |
| 2.2.2 突变体Kn2-7多肽的体内抗菌活性测定 | 第73-75页 |
| 2.2.2.0 实验小鼠的准备与处理 | 第73-74页 |
| 2.2.2.1 金黄色葡萄球菌感染菌液制备 | 第74页 |
| 2.2.2.2 金黄色葡萄球菌感染小鼠皮肤模型的建立 | 第74页 |
| 2.2.2.3 Kn2-7治疗实验 | 第74-75页 |
| 2.2.2.4 Kn2-7的治疗效果 | 第75页 |
| 3 结果 | 第75-83页 |
| 3.1 突变体Kn2-7多肽的体外抑菌功能 | 第75-80页 |
| 3.1.1 Kn2-7多肽的抗菌谱 | 第75-76页 |
| 3.1.2 Kn2-7抗耐药菌株效应 | 第76-77页 |
| 3.1.3 Kn2-7抑制细菌的生长 | 第77-80页 |
| 3.2 突变体Kn2-7多肽对皮肤感染的治愈效应 | 第80-83页 |
| 3.2.1 金黄色葡萄球菌感染小鼠皮肤模型的建立 | 第80-81页 |
| 3.2.2 感染小鼠经Kn2-7治疗后皮肤组织学分析 | 第81-82页 |
| 3.2.3 Kn2-7对金黄色葡萄球菌皮肤感染的治疗效果评估 | 第82-83页 |
| 4 讨论 | 第83-85页 |
| 第六章 突变体Kn2-7多肽的抗菌机制研究 | 第85-101页 |
| 1.引言 | 第85-86页 |
| 2. 材料和方法 | 第86-90页 |
| 2.1 材料 | 第86页 |
| 2.1.1 菌株 | 第86页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第86页 |
| 2.1.3 溶液配制 | 第86页 |
| 2.2 方法 | 第86-90页 |
| 2.2.1 Kn2-7的圆二色谱分析 | 第86-87页 |
| 2.2.2 实时杀菌实验 | 第87页 |
| 2.2.3 过氧化氢酶释放实验 | 第87-88页 |
| 2.2.4 透射电子显微镜(TEM) | 第88-89页 |
| 2.2.5 分子相互作用实验 | 第89页 |
| 2.2.6 Kn2-7与LTA和LPS的竞争结合实验 | 第89-90页 |
| 3. 结果 | 第90-98页 |
| 3.1 Kn2-7的二级结构预测分析 | 第90页 |
| 3.2 Kn2-7实时杀菌 | 第90-93页 |
| 3.3 Kn2-7快速释放细菌胞内过氧化氢酶 | 第93-94页 |
| 3.4 Kn2-7与细菌表面作用 | 第94-96页 |
| 3.5 分子相互作用实验 | 第96-97页 |
| 3.6 LTA与LPS竞争结合实验 | 第97-98页 |
| 4 讨论 | 第98-101页 |
| 研究总结 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-111页 |
| 博士研究生期间发表的论文 | 第111-112页 |
| 致谢 | 第112页 |
