| 摘要 | 第5-9页 |
| Abstract | 第9-13页 |
| 符号说明 | 第16-18页 |
| 1 前言 | 第18-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-46页 |
| 2.1 材料 | 第26-33页 |
| 2.1.1 实验用细胞 | 第26页 |
| 2.1.2 组织样本 | 第26页 |
| 2.1.3 组织芯片及随访资料 | 第26-27页 |
| 2.1.4 实验动物 | 第27页 |
| 2.1.5 菌株和质粒载体 | 第27页 |
| 2.1.6 试剂 | 第27-32页 |
| 2.1.7 主要实验仪器 | 第32-33页 |
| 2.2 方法 | 第33-46页 |
| 2.2.1 总RNA的抽提 | 第33-34页 |
| 2.2.2 细胞总蛋白的抽提及定量 | 第34-35页 |
| 2.2.3 Western-blotting (蛋白免疫印迹方法） | 第35-36页 |
| 2.2.4 质粒、miRNA或siRNA瞬时转染目的细胞 | 第36页 |
| 2.2.5 MTT 实验 | 第36页 |
| 2.2.6 细胞划痕实验 | 第36-37页 |
| 2.2.7 Transwell 侵袭实验 | 第37页 |
| 2.2.8 流式细胞分析（FAM)细胞周期与细胞调亡的变化 | 第37页 |
| 2.2.9 TGF-pi诱导后EMT现象 | 第37-38页 |
| 2.2.10 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测 | 第38-40页 |
| 2.2.11 免疫组化检测 | 第40页 |
| 2.2.12 原位杂交 | 第40-41页 |
| 2.2.13 免疫组化和原位杂交结果分析 | 第41页 |
| 2.2.14 Luciferase检测miR-429与靶基因3'UTR区结合的影响 | 第41-44页 |
| 2.2.15 pcDNA3.1-Onecut2载体的构建 | 第44页 |
| 2.2.16 裸鼠成瘤实验 | 第44-45页 |
| 2.2.17 HE染色 | 第45页 |
| 2.2.18 miR-429的低表达对结直肠癌预后预测的影响 | 第45页 |
| 2.2.19 统计学分析 | 第45-46页 |
| 3 结果 | 第46-76页 |
| 3.1 MIR-429在结直肠癌不同临床进展阶段的动态表达及其对结直肠癌预后预测的影响分析 | 第46-54页 |
| 3.1.1 miR-429在结直肠癌不同临床进展阶段的动态表达分析 | 第46-49页 |
| 3.1.2 原位杂交检测miR-429在结直肠癌不同临床进展阶段的动态表达模式 | 第49-51页 |
| 3.1.3 miR-429在结直肠癌中的表达水平与结直肠癌患者临床病理特征的相关性 | 第51-53页 |
| 3.1.4 miR-429的低表达对结直肠癌预后预测的影响 | 第53-54页 |
| 3.2 miR-429对结直肠癌细胞生物学行为的影响 | 第54-60页 |
| 3.2.1 miR-429在结直肠癌细胞中的转染效率分析 | 第54-55页 |
| 3.2.2 MTT实验检测miR-429对结直肠癌细胞生长活力的影响 | 第55-56页 |
| 3.2.3 流式细胞仪检测miR-429对SW620、SW480和HT-29细胞周期及凋亡的影响 | 第56-58页 |
| 3.2.4 裸鼠结直肠癌移植瘤实验证实miR-429抑制结直肠癌细胞SW620移植瘤的生长 | 第58-59页 |
| 3.2.5 HE染色观察结直肠癌SW620细胞裸鼠皮下移植瘤的形态学变化 | 第59-60页 |
| 3.3 miR-429通过调控靶基因Onecut2抑制结直肠癌细胞的上皮-间质转化(EMT) | 第60-68页 |
| 3.3.1 Onecut2是miR-429直接调控的靶基因 | 第60-62页 |
| 3.3.2 实时荧光定量PCR检测miR-429对所调控靶基因Onecut2 mRNA的影响 | 第62页 |
| 3.3.3 Western-blot检测miR-429对靶基因Onecut2表达的调控 | 第62-63页 |
| 3.3.4 miR-429与Onecut2在结直肠癌组织中表达的负相关性 | 第63-65页 |
| 3.3.5 miR-429通过靶基因Onecut2对结直肠癌细胞侵袭迁移能力的影响 | 第65-68页 |
| 3.3.6 miR-429抑制了结直肠癌细胞中TGF-β1诱导的上皮间质表型的转化 | 第68页 |
| 3.4 miR-429对EMT相关的转录因子和基因表达的影响 | 第68-76页 |
| 3.4.1 miR-429逆转了结直肠癌细胞中TGF-β1诱导的EMT相关的转录因子和基因的表达 | 第68-72页 |
| 3.4.2 miR-429对结直肠癌细胞裸鼠皮下移植瘤中EMT相关转录因子表达的影响 | 第72-76页 |
| 4 讨论 | 第76-83页 |
| 5 结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-91页 |
| 6 综述 | 第91-101页 |
| 参考文献 | 第97-101页 |
| 攻读博士学位期间主要的研究成果 | 第101-102页 |
| 致谢 | 第102页 |
