| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文縮写词简表 | 第10-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-19页 |
| 1.1 赤拟谷盗 | 第11-12页 |
| 1.2 谷胱甘肽硫转移酶(GSTs) | 第12-15页 |
| 1.2.1 GSTs简介 | 第12页 |
| 1.2.2 GSTs的分类 | 第12-13页 |
| 1.2.3 GSTs的结构 | 第13页 |
| 1.2.4 GSTs的功能 | 第13-15页 |
| 1.3 常见杀虫剂简介 | 第15-16页 |
| 1.4 昆虫GSTs的研究现状和进展 | 第16-17页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第17-19页 |
| 第2章 赤拟谷盗Delta GSTs基因的克隆 | 第19-29页 |
| 2.1 实验仪器 | 第19页 |
| 2.2 缓冲液及试剂配方 | 第19-20页 |
| 2.2.1 核酸电泳相关试剂 | 第19-20页 |
| 2.3 实验方法 | 第20-25页 |
| 2.3.1 含有酶切位点的全长引物的设计 | 第20-21页 |
| 2.3.2 目的基因全长序列的扩增 | 第21-22页 |
| 2.3.3 目的基因的TA克隆(TaKaRa) | 第22页 |
| 2.3.4 双酶切 | 第22-23页 |
| 2.3.5 连接 | 第23-24页 |
| 2.3.6 构建目的基因-BL21表达菌 | 第24-25页 |
| 2.3.7 重组蛋白的IPTG诱导表达 | 第25页 |
| 2.3.8 诱导表达后SDS-PAGE电泳鉴定 | 第25页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第25-29页 |
| 2.4.1 赤拟谷盗Delta-GSTs的保守性分析 | 第25-27页 |
| 2.4.2 赤拟谷盗Delta-GSTs基因的PCR扩增及TA克隆 | 第27-29页 |
| 第3章 赤拟谷盗Delta GSTs基因的RNAi分析 | 第29-44页 |
| 3.1 实验仪器 | 第29页 |
| 3.2 材料与试剂 | 第29-30页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第29-30页 |
| 3.2.2 缓冲液配制 | 第30页 |
| 3.3 实验方法 | 第30-34页 |
| 3.3.1 荧光定量PCR | 第30-31页 |
| 3.3.2 双链RNA(double-strand RNA)的合成 | 第31-32页 |
| 3.3.3 双链RNA的注射以及干扰效果检测 | 第32页 |
| 3.3.4 赤拟谷盗产卵量和卵孵化率统计 | 第32页 |
| 3.3.5 赤拟谷盗幼虫体内总的GSTs酶活力测定 | 第32-34页 |
| 3.3.6 赤拟谷盗幼虫对杀虫剂的易感性分析 | 第34页 |
| 3.3.7 数据处理 | 第34页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第34-44页 |
| 3.4.1 赤拟谷盗Delta-GSTs的发育时期表达模式分析 | 第34-35页 |
| 3.4.2 RNAi效果检测 | 第35-36页 |
| 3.4.3 Delta-GSTs基因对表型的影响 | 第36-38页 |
| 3.4.4 Delta-GSTs基因对赤拟谷盗生长发育的影响 | 第38-40页 |
| 3.4.5 Delta-GSTs基因对生殖的影响 | 第40-41页 |
| 3.4.6 Delta-GSTs对幼虫体内总GSTs酶活力的影响 | 第41-42页 |
| 3.4.7 Delta-GSTs基因与药物抗性 | 第42-44页 |
| 第4章 赤拟谷盗Delta GSTs蛋白的体外表达及酶活性分析 | 第44-54页 |
| 4.1 实验仪器 | 第44页 |
| 4.2 缓冲液及试剂配方 | 第44-46页 |
| 4.2.1 重组体构建相关试剂 | 第44-45页 |
| 4.2.2 蛋白质电泳相关试剂 | 第45页 |
| 4.2.3 蛋白质浓度测定相关试剂 | 第45-46页 |
| 4.2.4 蛋白纯化缓冲液 | 第46页 |
| 4.3 实验方法 | 第46-48页 |
| 4.3.1 重组蛋白的IPTG诱导表达 | 第46-47页 |
| 4.3.2 可溶性鉴定 | 第47页 |
| 4.3.3 蛋白纯化样品的制备 | 第47页 |
| 4.3.4 可溶性重组蛋白纯化 | 第47-48页 |
| 4.3.5 透析 | 第48页 |
| 4.3.6 重组蛋白GSTs酶活力测定 | 第48页 |
| 4.4 结果与分析 | 第48-54页 |
| 4.4.1 目的基因-pET32a克隆质粒载体的构建及验证 | 第48-50页 |
| 4.4.2 构建BL21-pET32a-目的基因的克隆菌 | 第50页 |
| 4.4.3 赤拟谷盗Delta-GSTs在E.coli中的诱导表达 | 第50-51页 |
| 4.4.4 重组蛋白的可溶性鉴定与纯化梯度选择 | 第51-52页 |
| 4.4.5 赤拟谷盗Delta-GSTs重组蛋白的纯化及其酶活性分析 | 第52-54页 |
| 第5章 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
