| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 前言 | 第13-33页 |
| 1. 血栓类疾病的概述 | 第13-20页 |
| 1.1 血栓疾病的种类及危害 | 第13页 |
| 1.2 血栓的种类及成因 | 第13-14页 |
| 1.3 血栓形成的分子机理 | 第14-18页 |
| 1.4 血栓的治疗方法 | 第18页 |
| 1.5 溶栓药物的相关研究 | 第18-20页 |
| 2. 已提取到的纤溶酶及其异源表达的相关研究 | 第20-24页 |
| 2.1 微生物来源的纤溶酶研究 | 第20-21页 |
| 2.2 蚓激酶 | 第21-22页 |
| 2.3 蛇毒纤溶酶及蛇毒纤溶酶激活剂 | 第22-23页 |
| 2.4 海洋生物来源的纤溶酶 | 第23-24页 |
| 3. 外源重组蛋白的原核表达和酵母表达系统的研究 | 第24-29页 |
| 3.1 原核表达系统 | 第24-27页 |
| 3.2 酵母表达系统 | 第27-29页 |
| 4. 蛋白复性的研究进展 | 第29-31页 |
| 5. 立题依据及研究意义 | 第31-33页 |
| 第一章 单环刺螠纤溶酶 Ⅲ 的基因克隆及序列分析 | 第33-48页 |
| 1. 材料、试剂 | 第33页 |
| 1.1 实验试剂及材料 | 第33页 |
| 1.2 培养基 | 第33页 |
| 2. 研究方法 | 第33-41页 |
| 2.1 N 端测序 | 第33页 |
| 2.2 单环刺螠虫体 R N A 的提取 | 第33-34页 |
| 2.3 RT- PCR获得扩增单环刺螠纤溶酶Ⅲ (UFEⅢ)的 cDNA | 第34-35页 |
| 2.4 简并 PCR获得UFEⅢ的部分序列 | 第35-38页 |
| 2.5 使用 5’ - FU L L R A C E 试剂盒扩增 U FEⅢ基因的 5’末 端序列 | 第38-40页 |
| 2.6 扩增UFEⅢ基因 的全长 | 第40-41页 |
| 2.7 UFE Ⅲ的生物信 息学分 析 | 第41页 |
| 3. 结果与分析 | 第41-47页 |
| 3.1 单环刺螠 R N A 的提 取结果 | 第41-42页 |
| 3.2 简并 PC R及 5 ’ R AC E PC R 结果 | 第42-43页 |
| 3.3 UFEⅢ基因的全 长扩增 | 第43-44页 |
| 3.4 单环刺螠纤溶酶 II I 的生物信息学分析结果 | 第44-47页 |
| 4. 讨论 | 第47-48页 |
| 第二章 单环刺螠 纤溶酶 I II 在大肠杆菌中的融合表达 | 第48-63页 |
| 1. 材料 | 第48-49页 |
| 1.1 菌株 及载体 | 第48页 |
| 1.2 主要分子和生化试剂 | 第48-49页 |
| 2. 方法 | 第49-56页 |
| 2.1 构建 p E T 32 a -UFE/p G E X -6 p- 1 -U FE重组载体 | 第49-51页 |
| 2.2 p E T 32a -UFE/p G E X - 6P - 1 -UFE的诱导表达 | 第51-52页 |
| 2.3 目的蛋白的纯化 | 第52-53页 |
| 2.4 表达产物的 SDS-PAG E检验 | 第53-54页 |
| 2.5 U FE 的WesternBlotting 检验 | 第54-55页 |
| 2.6 U FE 的活性检测 方法 | 第55-56页 |
| 3. 结果 | 第56-61页 |
| 3.1 构建 p E T 32 a -UFEⅢ/p G E X -6 P- 1 -U FEⅢ重组载体 | 第56-57页 |
| 3.2 pET 32a -UFEⅢ/pGEX-6P-1 -UFEIII 在 Rosetta 2(DE3) 中 的表达 | 第57-61页 |
| 4. 讨论 | 第61-63页 |
| 第三章 单环刺螠纤溶酶Ⅲ的复性研究 | 第63-70页 |
| 1. 材料 | 第63-64页 |
| 1.1 载体及菌株 | 第63页 |
| 1.2 分子及生化试剂 | 第63-64页 |
| 2. 方法 | 第64-66页 |
| 2.1 实验样品的制备 | 第64页 |
| 2.2 UFE 包涵体复性条件的研 究 | 第64-66页 |
| 2.3 复性后 Trx-UFE和 pET28 a-UFE的 SDS- PAGE及酶活测定 | 第66页 |
| 3. 结果 | 第66-69页 |
| 3.1 Trx- UFE 的包涵体表达及复性 | 第66-68页 |
| 3.2 pET 28a - UFE 包涵体的表达及复性 | 第68-69页 |
| 3.3 纤维蛋白平板法检测复性后的 T rx-UFE 和 pET2 8a -UFE 活性 | 第69页 |
| 4. 讨论 | 第69-70页 |
| 第四章 单环刺螠纤溶酶 III 真核表达系统的构建及分泌性表达 | 第70-78页 |
| 1. 材料 | 第70-71页 |
| 1.1 分子及生化试剂 | 第70页 |
| 1.2 菌株及质粒 | 第70-71页 |
| 1.3 培养基 | 第71页 |
| 2. 方法 | 第71-72页 |
| 2.1 引物设计 | 第71页 |
| 2.2 p I N A131 7-UFEⅢ- Y 4 载体的构建 | 第71-72页 |
| 2.3 N o tI 线性化 pI N A1317 -UFEII I -Y 4 | 第72页 |
| 2.4 p I N A131 7 -UFEⅢ- Y 4 转化感受态 Y. li p o ly ti c a Po 1 h | 第72页 |
| 3. 结果 | 第72-77页 |
| 3.1 p I N A131 7-UFEⅢ- Y 4 载体的构建 | 第72-73页 |
| 3.2 线性化 pIN A1317 -UFEIII -Y4 | 第73-74页 |
| 3.3 U FE Ⅲ在 Y. lipolytica Po1h 中的表达 | 第74-77页 |
| 4. 讨论 | 第77-78页 |
| 总结 | 第78-79页 |
| 研究的创新与不足 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
| 个人简历 | 第88页 |
| 发表的学术论文 | 第88-89页 |
