摘要 | 第3-4页 |
ABSTRACT | 第4页 |
目录 | 第5-7页 |
第一章 文献综述 | 第7-16页 |
1.1 Z-DNA和Z-RNA的结构与功能 | 第7-9页 |
1.1.1 Z-DNA的结构和功能 | 第7-8页 |
1.1.2 Z-RNA的结构和功能 | 第8-9页 |
1.2 Zα结构域以及其研究方法 | 第9-11页 |
1.2.1 Zα结构域 | 第9-10页 |
1.2.2 Zα与Z-DNA的相互作用研究方法 | 第10-11页 |
1.3 PKR和PKZ | 第11-12页 |
1.4 RNA干扰和细胞凋诱导亡 | 第12-14页 |
1.4.1 RNA干扰 | 第12-13页 |
1.4.2 细胞凋亡 | 第13-14页 |
1.5 本研究的目的和意义 | 第14-16页 |
第二章 材料和方法 | 第16-27页 |
2.1 仪器与试剂 | 第16-18页 |
2.1.1 主要仪器 | 第16页 |
2.1.2 主要试剂、试剂盒 | 第16-17页 |
2.1.3 实验材料 | 第17页 |
2.1.4 引物 | 第17-18页 |
2.2 相关软件 | 第18页 |
2.3 实验方法 | 第18-27页 |
2.3.1 Zα蛋白的表达和定量 | 第18-20页 |
2.3.2 Zα蛋白与核酸结合分析 | 第20-22页 |
2.3.3 PKZ与细胞凋亡分析 | 第22-27页 |
第三章 实验结果 | 第27-38页 |
3.1 蛋白纯化结果 | 第27页 |
3.2 蛋白定量结果 | 第27-28页 |
3.3 表达多肽能够将Hairpin6 DNA翻转为Z型构象 | 第28-31页 |
3.3.1 Hairpin 6核酸在高盐能够形成Z构象 | 第28-29页 |
3.3.2 Zα对Hairpin 6 RNA构象的影响 | 第29-31页 |
3.3.3 磷酸化酶对Zα翻转DNA功能的影响 | 第31页 |
3.4 Zα蛋白与核酸的相互作用 | 第31-33页 |
3.4.1 Zα蛋白与CG序列、Primer序列、TA序列的凝胶阻滞结合 | 第31-32页 |
3.4.2 发卡序列与多肽的亲和性分析 | 第32-33页 |
3.5 草鱼肾细胞内PKZ的沉默检测 | 第33-35页 |
3.5.1 SiRNA的提取与定量 | 第33-34页 |
3.5.2 细胞内PKZ的表达与沉默 | 第34-35页 |
3.6 PKZ的激活能诱导细胞凋亡 | 第35-38页 |
3.6.1 MTT法测定PKZ对细胞活性影响 | 第35-37页 |
3.6.2 DAPI染色法测定PKZ对细胞活性影响 | 第37-38页 |
第四章 分析与讨论 | 第38-42页 |
4.1 Zα功能 | 第38-39页 |
4.1.1 Zα与RNA分子结合 | 第38-39页 |
4.1.2 凝胶阻滞进一步证明Zα与核酸结合 | 第39页 |
4.1.3 Zα结构域无磷酸化效应 | 第39页 |
4.2 PKZ与细胞凋亡结果分析与讨论 | 第39-41页 |
4.2.1 PKZ在外源刺激下的高表达 | 第39-40页 |
4.2.2 PKZ诱导细胞凋亡 | 第40页 |
4.2.3 PKZ信号通路的进一步确认 | 第40-41页 |
4.3 关于PKZ的展望 | 第41-42页 |
参考文献 | 第42-47页 |
致谢 | 第47-48页 |
附录:研究成果 | 第48页 |