| 缩略词说明 | 第5-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1.前言 | 第13-21页 |
| 1.1 奶牛乳腺及泌乳 | 第13-15页 |
| 1.1.1 乳腺的结构 | 第13页 |
| 1.1.2 乳腺的发育过程 | 第13-14页 |
| 1.1.3 乳汁的合成与分泌机制 | 第14-15页 |
| 1.2 奶牛乳腺内乳蛋白合成相关信号通路 | 第15-18页 |
| 1.2.1 乳蛋白 | 第15页 |
| 1.2.2 乳蛋白合成的信号通路 | 第15-17页 |
| 1.2.3 催乳素、胰岛素对乳蛋白合成的影响 | 第17-18页 |
| 1.3 MEN1基因的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.3.1 MEN1基因的发现 | 第18页 |
| 1.3.2 MEN1基因及Menin蛋白的结构 | 第18-19页 |
| 1.3.3 Menin的生物学功能 | 第19页 |
| 1.3.4 MEN1基因参与乳腺发育的调控 | 第19-20页 |
| 1.3.5 MEN1基因与乳蛋白合成信号通路相关 | 第20页 |
| 1.4 研究的目的与意义 | 第20-21页 |
| 2.材料与方法 | 第21-41页 |
| 2.1 实验材料、仪器和试剂 | 第21-23页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第21页 |
| 2.1.3 主要实验试剂及来源 | 第21-22页 |
| 2.1.4 常用试剂的配制 | 第22-23页 |
| 2.2 试验方法与内容 | 第23-39页 |
| 2.2.1 奶牛乳腺上皮细胞系MAC-T细胞的培养与鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.2 MEN1基因过表达体系的建立 | 第24-35页 |
| 2.2.3 MEN1基因过表达对乳蛋白合成相关通路的影响 | 第35-36页 |
| 2.2.4 MEN1基因干扰体系的建立 | 第36-38页 |
| 2.2.5 MEN1基因低表达对乳蛋白合成相关通路的影响 | 第38-39页 |
| 2.3 MEN1基因表达变化对奶牛乳腺上皮细胞内CSNK mRNA表达的影响 | 第39-40页 |
| 2.3.1 MAC-T细胞内不同亚型酪蛋白mRNA表达检测 | 第39页 |
| 2.3.2 qRT-PCR检测MEN1基因过/低表达对MAC-T细胞内CSNK mRNA表达的影响 | 第39-40页 |
| 2.4 检测不同时期奶牛乳腺组织内MEN1基因及乳蛋白合成相关信号通路基因mRNA的表达变化 | 第40页 |
| 2.5 催乳素及胰岛素对奶牛乳腺上皮细胞内MEN1基因表达的影响 | 第40页 |
| 2.6 统计分析 | 第40-41页 |
| 3. 试验结果 | 第41-55页 |
| 3.1 奶牛乳腺上皮细胞系MAC-T细胞的生物学性状检测 | 第41-42页 |
| 3.1.1 MAC-T细胞的形态观察 | 第41页 |
| 3.1.2 MAC-T细胞生长曲线的绘制 | 第41-42页 |
| 3.2 奶牛MEN1基因真核表达载体的构建及过表达体系的建立 | 第42-46页 |
| 3.2.1 MEN1基因PCR扩增结果 | 第42页 |
| 3.2.2 重组质粒的菌落PCR鉴定 | 第42-43页 |
| 3.2.3 重组质粒的酶切鉴定 | 第43-44页 |
| 3.2.4 重组质粒的测序鉴定 | 第44页 |
| 3.2.5 MEN1基因过表达体系的建立 | 第44-46页 |
| 3.3 MEN1基因过表达对乳蛋白合成相关通路的影响 | 第46-48页 |
| 3.3.1 MEN1基因过表达对乳蛋白合成相关通路基因mRNA表达的影响 | 第46-47页 |
| 3.3.2 MEN1基因过表达对乳蛋白合成相关通路蛋白表达的影响 | 第47-48页 |
| 3.4 MEN1基因干扰体系的建立 | 第48-49页 |
| 3.4.1 奶牛乳腺上皮细胞内荧光报告基因表达检测 | 第48-49页 |
| 3.4.2 干扰质粒pRNAT-U6.1/Neo-shRNA-bMEN1最佳条件的确定 | 第49页 |
| 3.5 MEN1基因低表达对乳蛋白合成相关通路的影响 | 第49-51页 |
| 3.5.1 MEN1基因低表达对乳蛋白合成相关通路基因mRNA表达的影响 | 第49-50页 |
| 3.5.2 MEN1基因低表达对乳蛋白合成相关通路蛋白表达的影响 | 第50-51页 |
| 3.6 MEN1基因表达变化对奶牛乳腺上皮细胞内CSNK mRNA表达的影响 | 第51-52页 |
| 3.6.1 MAC-T细胞内不同类型乳蛋白mRNA表达检测 | 第51-52页 |
| 3.6.2 qRT-PCR检测MEN1基因过/低表达对MAC-T细胞内CSNK mRNA表达的影响 | 第52页 |
| 3.7 检测不同时期奶牛乳腺组织内MEN1基因及乳蛋白合成相关信号通路基因mRNA的表达变化 | 第52-53页 |
| 3.8 催乳素、胰岛素对奶牛乳腺上皮细胞内MEN1基因表达的影响 | 第53-55页 |
| 4 讨论 | 第55-60页 |
| 4.1 奶牛乳腺上皮细胞系的应用 | 第55页 |
| 4.2 奶牛MEN1基因过表达及低表达体系的建立 | 第55-56页 |
| 4.3 奶牛MEN1/menin过表达及低表达后对乳蛋白合成的影响 | 第56-57页 |
| 4.4 不同泌乳阶段奶牛乳腺组织内乳蛋白合成相关基因及MEN1基因的表达变化 | 第57-58页 |
| 4.5 催乳素、胰岛素参与调控奶牛乳腺上皮细胞内MEN1基因的表达 | 第58-59页 |
| 4.6 MEN1/menin 在乳腺发育及泌乳中的作用解析 | 第59-60页 |
| 5 结论与研究展望 | 第60-61页 |
| 5.1 结论 | 第60页 |
| 5.2 创新点 | 第60页 |
| 5.3 研究展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 致谢 | 第69-71页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第71页 |
