| 致谢 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-37页 |
| 1. 马铃薯S病毒的研究进展 | 第16-24页 |
| 1.1 寄主范围、传播途径、症状以及分布 | 第16-18页 |
| 1.2 马铃薯S病毒的株系划分 | 第18-19页 |
| 1.3 马铃薯S病毒粒子的形态和基因组结构特征 | 第19-21页 |
| 1.4 马铃薯S病毒的检测技术 | 第21-23页 |
| 1.4.1 生物学检测方法 | 第21页 |
| 1.4.2 电镜观察 | 第21页 |
| 1.4.3 分子生物学方法 | 第21-22页 |
| 1.4.4 血清学检测方法 | 第22-23页 |
| 1.5 马铃薯S病毒的防治策略 | 第23-24页 |
| 1.5.1 生产马铃薯脱毒种薯种苗 | 第23-24页 |
| 1.5.2 选育马铃薯抗病品种 | 第24页 |
| 1.5.3 化学药剂防治 | 第24页 |
| 1.5.4 农业防治 | 第24页 |
| 2 马铃薯Y病毒的研究进展 | 第24-29页 |
| 2.1 寄主范围、症状、传播途径及分布 | 第25页 |
| 2.2 马铃薯Y病毒的株系划分 | 第25-26页 |
| 2.3 马铃薯Y病毒的分子生物学特征 | 第26-27页 |
| 2.4 马铃薯Y病毒的检测技术 | 第27-29页 |
| 2.4.1 生物学鉴定 | 第27页 |
| 2.4.2 电镜观察 | 第27-28页 |
| 2.4.3 分子生物学方法 | 第28页 |
| 2.4.4 血清学检测方法 | 第28-29页 |
| 2.5 马铃薯Y病毒的防治策略 | 第29页 |
| 3. 单克隆抗体技术及其在植物病毒学中的应用 | 第29-37页 |
| 3.1 抗体的结构及特性 | 第31-32页 |
| 3.2 单克隆抗体技术 | 第32-35页 |
| 3.2.1 杂交瘤技术基本原理 | 第32-33页 |
| 3.2.2 杂交瘤技术基本流程 | 第33-34页 |
| 3.2.3 兔单克隆抗体的发展 | 第34-35页 |
| 3.3 单克隆抗体在植物病毒学中的应用 | 第35-37页 |
| 第二章 马铃薯S病毒单克隆抗体的制备及应用 | 第37-65页 |
| 1 材料与方法 | 第37-52页 |
| 1.1 病毒材料、培养基、抗体、硝酸纤维素膜、菌株和质粒 | 第37-38页 |
| 1.2 马铃薯S病毒的提纯 | 第38页 |
| 1.3 单克隆抗体的制备 | 第38-41页 |
| 1.3.1 小鼠免疫 | 第38-39页 |
| 1.3.2 细胞融合与培养 | 第39页 |
| 1.3.3 杂交瘤细胞的单克隆化及扩增 | 第39-40页 |
| 1.3.4 杂交瘤细胞株的保存和复苏 | 第40页 |
| 1.3.5 腹水抗体的制备及纯化 | 第40-41页 |
| 1.3.6 腹水抗体效价的测定 | 第41页 |
| 1.3.7 单克隆抗体类型及亚类鉴定 | 第41页 |
| 1.4 单抗特性分析及血清学方法的建立 | 第41-49页 |
| 1.4.1 ACP-ELISA的建立及单抗特性分析 | 第41-43页 |
| 1.4.2 Western blot分析PVS单抗的特异性 | 第43-46页 |
| 1.4.3 DAS-ELISA的建立及其应用 | 第46-47页 |
| 1.4.4 dot-ELISA以及Tissue blot-ELISA的建立及其应用 | 第47-49页 |
| 1.5 RT-PCR方法检测PVS | 第49-52页 |
| 1.5.1 TRIzol试剂法提取总RNA | 第49-50页 |
| 1.5.2 RT-PCR | 第50-52页 |
| 2 实验结果与分析 | 第52-62页 |
| 2.1 马铃薯S病毒的提纯及抗原制备 | 第52-53页 |
| 2.2 杂交瘤细胞的融合、筛选和克隆 | 第53页 |
| 2.3 腹水抗体制备、效价测定及抗体亚类鉴定 | 第53页 |
| 2.4 PVS单抗的Western blot分析 | 第53-54页 |
| 2.5 ACP-ELISA方法的建立及单抗特异的分析 | 第54-56页 |
| 2.5.1 检测马铃薯植物中PVS的ACP-ELISA方法的建立 | 第54页 |
| 2.5.2 ACP-ELISA方法分析PVS单抗特异性 | 第54-55页 |
| 2.5.3 ACP-ELISA方法分析PVS单抗的灵敏度 | 第55-56页 |
| 2.5.4 ACP-ELISA方法检测田间马铃薯中的PVS | 第56页 |
| 2.6 DAS-ELISA检测方法的建立及应用 | 第56-59页 |
| 2.6.1 检测马铃薯植物中PVS的DAS-ELISA的建立 | 第56-57页 |
| 2.6.2 DAS-ELISA方法的特异性分析 | 第57页 |
| 2.6.3 DAS-ELISA方法的灵敏度分析 | 第57-58页 |
| 2.6.4 DAS-ELISA方法的检测应用 | 第58-59页 |
| 2.7 dot-ELISA和Tissue blot-ELISA检测方法的建立及应用 | 第59-62页 |
| 2.7.1 检测马铃薯植物中PVS的dot-ELISA和Tissue blot-ELISA的建立 | 第59页 |
| 2.7-2 dot-ELISA和Tissue blot-ELISA方法的特异性分析 | 第59-60页 |
| 2.7.3 dot-ELISA方法的灵敏度分析 | 第60-61页 |
| 2.7.4 dot-ELISA和Tissue blot-ELISA方法的田间应用 | 第61-62页 |
| 3 讨论 | 第62-65页 |
| 第三章 马铃薯Y病毒单克隆抗体的制备及应用 | 第65-80页 |
| 1 材料与方法 | 第65-68页 |
| 1.1 病毒材料、培养基和抗体、硝酸纤维素膜、生化试剂 | 第65页 |
| 1.2 马铃薯Y病毒的提纯 | 第65-66页 |
| 1.3 杂交瘤细胞的制备 | 第66页 |
| 1.4 腹水制备和抗体纯化 | 第66页 |
| 1.5 抗体腹水效价的测定和类型及亚类鉴定 | 第66页 |
| 1.6 Western blot分析PVY单抗的特异性 | 第66页 |
| 1.7 检测PVY血清学方法和IC-RT-PCR方法的建立及其应用 | 第66-68页 |
| 1.7.1 ACP-ELISA检测方法的建立及单抗特性分析 | 第66-67页 |
| 1.7.2 dot-blot ELISA和Tissue blot-ELISA的建立及检测应用 | 第67页 |
| 1.7.3 IC-RT-PCR的建立及灵敏度分析 | 第67-68页 |
| 1.7.4 RT-PCR方法检测PVY | 第68页 |
| 1.7.5 ACP-ELISA、dot-ELISA、Tissue blot-ELISA血清学方法的田间应用 | 第68页 |
| 2 实验结果与分析 | 第68-77页 |
| 2.1 马铃薯Y病毒的提纯 | 第69页 |
| 2.2 细胞的融合、杂交瘤的筛选和克隆 | 第69页 |
| 2.3 腹水抗体制备、效价测定及抗体亚类鉴定 | 第69-70页 |
| 2.4 Western blot分析PVY单抗的特异性 | 第70-71页 |
| 2.5 ACP-ELISA方法的建立及应用 | 第71-73页 |
| 2.5.1 检测PVY的ACP-ELISA方法的建立 | 第71页 |
| 2.5.2 ACP-ELISA方法分析PVY单抗的特异性 | 第71-72页 |
| 2.5.3 ACP-ELISA方法分析PVY单抗的灵敏度 | 第72-73页 |
| 2.5.4 ACP-ELISA方法的田间检测应用 | 第73页 |
| 2.6 dot-ELISA和Tissue blot-ELISA方法的建立及应用 | 第73-76页 |
| 2.6.1 检测PVY的dot-ELISA和Tissue blot-ELISA方法的建立 | 第73页 |
| 2.6.2 dot-ELISA和Tissue blot-ELISA方法的特异性分析 | 第73-74页 |
| 2.6.3 dot-ELISA的灵敏度分析 | 第74-75页 |
| 2.6.4 dot-ELISA和Tissue blot-ELISA方法田间检测应用 | 第75-76页 |
| 2.7 IC-RT-PCR方法的建立及应用 | 第76-77页 |
| 3 讨论 | 第77-80页 |
| 参考文献 | 第80-91页 |
| 附录A 本论文中所用病毒缩写及中英文对照 | 第91-92页 |
| 附录B 常用生化及分子生物学试剂与仪器 | 第92-94页 |
| 附录C 常用缓冲液及培养基配方 | 第94-98页 |
| 在学期间所取得的科研成果 | 第98页 |
