| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 0 前言 | 第13-43页 |
| 1 有性生殖的概述 | 第13-18页 |
| 1.1 繁殖的概念和类型 | 第13-14页 |
| 1.2 细胞增殖的方式 | 第14-16页 |
| 1.2.1 无丝分裂 | 第14-15页 |
| 1.2.2 有丝分裂 | 第15页 |
| 1.2.3 减数分裂 | 第15-16页 |
| 1.3 有性生殖的意义 | 第16-18页 |
| 2. 判定有性生殖的方法 | 第18-29页 |
| 2.1 性过程的形态学证据 | 第18-19页 |
| 2.2 性过程的DNA证据 | 第19-28页 |
| 2.2.1 染色体的形态和杂合度 | 第19-20页 |
| 2.2.2 系统演化不确定性 | 第20页 |
| 2.2.3 群体遗传学 | 第20-21页 |
| 2.2.4 梅塞尔效应(Meselson effect) | 第21-23页 |
| 2.2.5 转座子(Transposble elements,TEs) | 第23-24页 |
| 2.2.6 比较基因组学 | 第24-28页 |
| 2.3 基因功能的验证 | 第28-29页 |
| 2.3.1 计算机预测基因功能 | 第28-29页 |
| 2.3.2 实验验证基因功能 | 第29页 |
| 3 减数分裂相关的基因 | 第29-35页 |
| 3.1 减数分裂开始,DNA的复制和同源染色体配对 | 第30页 |
| 3.2 减数分裂的进行,同源染色体重组 | 第30-34页 |
| 3.3 减数分裂过程的延续 | 第34-35页 |
| 4 三角褐指藻研究现状 | 第35-41页 |
| 4.1 硅藻的分类地位及研究现状 | 第35-39页 |
| 4.2 三角褐指藻的生物学特性及研究现状 | 第39-41页 |
| 5. 本实验的目的和意义 | 第41-43页 |
| 1 三角褐指藻减数分裂相关基因的系统学研究 | 第43-64页 |
| 1.1 材料与方法 | 第44-47页 |
| 1.1.1 材料 | 第44-45页 |
| 1.1.1.1 数据来源 | 第44页 |
| 1.1.1.2 所用的软件、程序 | 第44-45页 |
| 1.1.2 方法 | 第45-47页 |
| 1.1.2.1 本地数据库的建立及本地搜索 | 第45-46页 |
| 1.1.2.2 多序列比对和系统发育分析 | 第46-47页 |
| 1.2 结果与讨论 | 第47-63页 |
| 1.3 小结 | 第63-64页 |
| 2 三角褐指藻(P.tricornutum Bohlin)减数分裂相关基因同源基因的表达分析 | 第64-72页 |
| 2.1 材料方法 | 第64-69页 |
| 2.1.1 藻种及培养方法 | 第64-65页 |
| 2.1.2. 三角褐指藻(P.tricornutum)总RNA的提取 | 第65-66页 |
| 2.1.3. DNase处理总RNA,消化基因组DNA | 第66页 |
| 2.1.4. cDNA合成反应(TaKaRa M-MLV RTase cDNA Synthesis Kit) | 第66-68页 |
| 2.1.4.1 第一链cDNA合成反应 | 第66-67页 |
| 2.1.4.2 第二链cDNA合成及平末端化 | 第67页 |
| 2.1.4.3 cDNA纯化 | 第67-68页 |
| 2.1.5 减数分裂相关基因引物设计与合成 | 第68页 |
| 2.1.6 减数分裂相关基因的RT-PCR扩增 | 第68-69页 |
| 2.2 结果讨论 | 第69-71页 |
| 2.2.1. RNA提取1%琼脂糖电泳检测 | 第69-70页 |
| 2.2.2. 减数分裂相关基因的是否表达检测 | 第70-71页 |
| 2.3 小结 | 第71-72页 |
| 3 三角褐指藻(P.tricornutum Bohlin)SPO11及DMC1同源基因的克隆 | 第72-87页 |
| 3.1 材料与方法 | 第73-81页 |
| 3.1.1 三角褐指藻(P.tricornutum)基因组总DNA的提取 | 第73页 |
| 3.1.2 引物设计及合成 | 第73-74页 |
| 3.1.3 质粒的制备和提取 | 第74-77页 |
| 3.1.3.1 质粒来源及结构 | 第74-76页 |
| 3.1.3.2 质粒制备 | 第76页 |
| 3.1.3.3 质粒的提取(碱裂解法小量提取质粒) | 第76页 |
| 3.1.3.4 溶液的配制 | 第76-77页 |
| 3.1.4 三角褐指藻基因组目的片段的PCR扩增 | 第77页 |
| 3.1.5 PCR产物琼脂糖凝胶回收(回收试剂盒) | 第77-78页 |
| 3.1.6 pYC2 NT/C及PCR产物双酶切及产物纯化回收 | 第78页 |
| 3.1.7 连接反应 | 第78-79页 |
| 3.1.8 转化 | 第79-80页 |
| 3.1.9 阳性克隆的筛选与菌检 | 第80页 |
| 3.1.10 阳性克隆的测序 | 第80-81页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第81-86页 |
| 3.2.1 三角褐指藻基因组DNA提取 | 第81页 |
| 3.2.2 SPO11及DMC1同源基因全长扩增 | 第81-82页 |
| 3.2.3 SPO11同源基因表达载体构建 | 第82-83页 |
| 3.2.4 DMC1同源基因表达载体构建 | 第83-84页 |
| 3.2.5. 表达载体检验 | 第84-86页 |
| 3.3 小结 | 第86-87页 |
| 4 三角褐指藻(P.tricornutum)SPO11、DMC1同源基因在酵母(S.cerevisiae)中的功能验证 | 第87-107页 |
| 4.1 材料与方法 | 第87-96页 |
| 4.1.1 切除三角褐指藻SPO11-1、DMC1-9基因内含子 | 第88-91页 |
| 4.1.1.1 三角褐指藻SPO11-1、DMC1-9基因切除内含子原理 | 第88-89页 |
| 4.1.1.2 引物设计 | 第89页 |
| 4.1.1.3 切除内含子 | 第89-90页 |
| 4.1.1.4 DpnI酶切及延伸产物转化E.coli | 第90页 |
| 4.1.1.5 挑阳性单克隆扩大培养、提质粒及产物检测 | 第90-91页 |
| 4.1.1.6 阳性克隆测序 | 第91页 |
| 4.1.2 三角褐指藻SPO11、DMC1同源基因在酵母中的功能验证 | 第91-96页 |
| 4.1.2.1 菌种、培养基和主要试剂 | 第91-92页 |
| 4.1.2.2 酵母突变株的鉴定 | 第92-94页 |
| 4.1.2.3 二倍体酵母突变株的获得 | 第94页 |
| 4.1.2.4 酵母二倍体突变株的流式细胞检测 | 第94-95页 |
| 4.1.2.5 酵母高效转化(醋酸锂转化法) | 第95页 |
| 4.1.2.6 酵母转化株的产孢实验 | 第95-96页 |
| 4.2. 结果与讨论 | 第96-106页 |
| 4.2.1 三角褐指藻SPO11-1、DMC1-9基因内含子的切除 | 第96-99页 |
| 4.2.1.1 三角褐指藻SPO11-1、DMC1-9基因切除内含子RCR反应 | 第96-97页 |
| 4.2.1.2 内含子切除反应产物的DpnI酶切 | 第97-98页 |
| 4.2.1.3 阳性单克隆的扩大培养及质粒检测 | 第98-99页 |
| 4.2.2 三角褐指藻SPO11、DMC1同源基因功能验证 | 第99-106页 |
| 4.2.2.1 酵母突变株的鉴定 | 第99-100页 |
| 4.2.2.2 二倍体酵母突变株的获得及流式细胞检测 | 第100-101页 |
| 4.2.2.3 酵母spo11-/-突变株的产孢实验 | 第101-104页 |
| 4.2.2.4 酵母dmc1-/-突变株的产孢实验 | 第104-106页 |
| 4.3 小结 | 第106-107页 |
| 5 结论 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-122页 |
| 附录 | 第122-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |
| 个人简历 | 第127页 |
| 发表的学术论文 | 第127页 |
