摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
1 绪论 | 第11-16页 |
1.1 转基因白桦的研究背景 | 第11页 |
1.2 表观遗传学 | 第11页 |
1.3 植物DNA甲基化的遗传与变异 | 第11-12页 |
1.3.1 植物DNA甲基化的遗传 | 第11-12页 |
1.3.2 植物DNA甲基化的变异 | 第12页 |
1.4 植物DNA甲基化与转基因沉默 | 第12-13页 |
1.5 外源基因的遗传和表达稳定性 | 第13页 |
1.6 植物DNA甲基转移酶与甲基化有关的蛋白 | 第13-14页 |
1.6.1 MET1家族 | 第13页 |
1.6.2 CMT家族 | 第13页 |
1.6.3 DRM家族 | 第13-14页 |
1.7 DNA甲基化的研究方法 | 第14-15页 |
1.7.1 高效液相色谱法 | 第14页 |
1.7.2 亚硫酸盐测序法 | 第14页 |
1.7.3 甲基化敏感的限制性内切酶法 | 第14页 |
1.7.4 MSAP法 | 第14页 |
1.7.5 染色质免疫共沉淀 | 第14-15页 |
1.8 本研究的目的意义 | 第15-16页 |
2 外源基因在转基因白桦杂交子代中的遗传稳定性 | 第16-27页 |
2.1 材料与方法 | 第16-21页 |
2.1.1 实验材料 | 第16-17页 |
2.1.2 试验方法 | 第17-21页 |
2.2 结果与分析 | 第21-24页 |
2.2.1 GUS检测结果 | 第21页 |
2.2.2 DNA提取 | 第21-22页 |
2.2.3 多重PCR | 第22页 |
2.2.4 转基因白桦F_1外源基因整合稳定性分析 | 第22-23页 |
2.2.5 bgt外源基因的表达 | 第23-24页 |
2.3 讨论 | 第24-26页 |
2.3.1 gus报告基因的优缺点 | 第24-25页 |
2.3.2 白桦总RNA和DNA的提取 | 第25页 |
2.3.3 杂交子代外源基因遗传稳定性 | 第25-26页 |
2.3.4 白桦的自交不亲和性 | 第26页 |
2.4 本章小结 | 第26-27页 |
3 外源基因启动子区及编码区DNA甲基化分析 | 第27-39页 |
3.1 材料与方法 | 第27-29页 |
3.1.1 实验材料 | 第27页 |
3.1.2 试验方法 | 第27-29页 |
3.2 结果与分析 | 第29-37页 |
3.2.1 gus基因启动子区甲基化分析 | 第29-33页 |
3.2.2 bgt基因启动子区和编码区甲基化分析 | 第33-37页 |
3.3 讨论 | 第37-38页 |
3.3.1 亚硫酸盐测序的优缺点 | 第37页 |
3.3.2 白桦外源基因胞嘧啶甲基化模式与稳定性 | 第37-38页 |
3.3.3 启动子区与编码区甲基化与植物转基因沉默的关系 | 第38页 |
3.4 本章小结 | 第38-39页 |
4 白桦BpCMT、BpMET、BpDRM基因的克隆及在亲子代中表达分析 | 第39-58页 |
4.1 材料与方法 | 第39-43页 |
4.1.1 实验材料 | 第39页 |
4.1.2 实验方法 | 第39-43页 |
4.2 结果与分析 | 第43-55页 |
4.2.1 白桦BpMET、BpCMT、BpDRM基因保守区的克隆 | 第43-44页 |
4.2.2 白桦BpMET基因全序列的获得 | 第44-45页 |
4.2.3 白桦BpMET基因cDNA全长的获得 | 第45页 |
4.2.4 白桦BpMET基因全序列分析 | 第45-48页 |
4.2.5 白桦BpCMT和BpDRM基因cDNA全长的获得 | 第48页 |
4.2.6 白桦BpCMT和BpDRM基因序列分析 | 第48-53页 |
4.2.7 甲基化相关基因BpCMT、BpMET和BpDRM在转基因白桦亲子代中的表达 | 第53-55页 |
4.3 讨论 | 第55-56页 |
4.3.1 CODEHOP设计简并引物 | 第55页 |
4.3.2 DNA甲基转移酶基因的分离 | 第55-56页 |
4.3.3 染色体步移与Sidefinding方法的比较 | 第56页 |
4.4 本章小结 | 第56-58页 |
结论 | 第58-60页 |
参考文献 | 第60-65页 |
攻读学位期间发表的学术论文 | 第65-66页 |
致谢 | 第66-67页 |