| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略表 | 第17-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-39页 |
| 1.1 癌症及肺癌的现状 | 第19页 |
| 1.2 肺癌的分类和分期 | 第19-22页 |
| 1.3 肺癌的早期诊断和治疗方法 | 第22-26页 |
| 1.3.1 肺癌的早期诊断 | 第22-24页 |
| 1.3.2 肺癌的治疗方法 | 第24-26页 |
| 1.4 表观遗传学和DNA甲基化 | 第26-33页 |
| 1.4.1 表观遗传学 | 第26页 |
| 1.4.2 DNA甲基化 | 第26-27页 |
| 1.4.3 DNA甲基化的检测方法 | 第27-31页 |
| 1.4.4 DNA甲基化和肿瘤 | 第31-33页 |
| 1.5 环境致癌因素 | 第33-36页 |
| 1.5.1 环境致癌因素种类 | 第34页 |
| 1.5.2 多环芳烃类物质对肺癌的危害 | 第34-35页 |
| 1.5.3 BPDE-DNA加合物的检测方法 | 第35-36页 |
| 1.6 云南宣威肺癌的概述 | 第36-37页 |
| 1.7 本课题的研究目的及意义 | 第37-39页 |
| 第二章 肺癌组织中RASSF1A和TBX5基因甲基化的检测 | 第39-73页 |
| 2.1 引言 | 第39页 |
| 2.2 实验材料 | 第39-44页 |
| 2.2.1 实验样本和细胞 | 第39页 |
| 2.2.2 实验主要耗材 | 第39-40页 |
| 2.2.3 实验主要试剂 | 第40-41页 |
| 2.2.4 主要实验仪器 | 第41-42页 |
| 2.2.5 主要试剂配置方法 | 第42-44页 |
| 2.3 实验方法 | 第44-54页 |
| 2.3.1 肺癌组织样本收集 | 第44页 |
| 2.3.2 A549细胞培养 | 第44-46页 |
| 2.3.3 石蜡包埋与切片 | 第46-47页 |
| 2.3.4 HE染色 | 第47页 |
| 2.3.5 FFPE组织DNA提取 | 第47-49页 |
| 2.3.6 核酸定量 | 第49页 |
| 2.3.7 重亚硫酸氢盐转化 | 第49-50页 |
| 2.3.8 普通PCR | 第50-51页 |
| 2.3.9 琼脂糖凝胶电泳 | 第51-52页 |
| 2.3.10 PCR产物纯化 | 第52页 |
| 2.3.11 基因克隆 | 第52-53页 |
| 2.3.12 菌落PCR | 第53-54页 |
| 2.3.13 测序结果分析 | 第54页 |
| 2.3.14 统计学分析 | 第54页 |
| 2.4 实验结果和讨论 | 第54-69页 |
| 2.4.1 肺癌组织样本统计 | 第55-56页 |
| 2.4.2 肺癌FFPE组织DNA提取 | 第56页 |
| 2.4.3 RASSF1A/TBX5基因启动子预测和引物设计 | 第56-58页 |
| 2.4.4 RASSF1A/TBX5目的基因扩增和克隆 | 第58-62页 |
| 2.4.5 重亚硫酸盐测序结果 | 第62-63页 |
| 2.4.6 RASSF1A/TBX5基因在所有肺癌样本中的甲基化频率 | 第63-65页 |
| 2.4.7 RASSF1A/TBX5基因在肺癌和癌旁组织中的甲基化水平 | 第65-66页 |
| 2.4.8 RASSF1A/TBX5基因的CpG位点甲基化情况 | 第66-67页 |
| 2.4.9 RASSF1A/TBX5基因甲基化和肺癌临床特征的相关性分析 | 第67-69页 |
| 2.5 讨论 | 第69-71页 |
| 2.6 小结 | 第71-73页 |
| 第三章 BPDE-DNA加合物在肺癌组织中的检测 | 第73-83页 |
| 3.1 引言 | 第73页 |
| 3.2 实验材料 | 第73-74页 |
| 3.2.1 主要实验耗材 | 第73页 |
| 3.2.2 主要实验仪器 | 第73-74页 |
| 3.2.3 主要实验试剂 | 第74页 |
| 3.3 实验方法 | 第74-76页 |
| 3.3.1 免疫荧光 | 第74-75页 |
| 3.3.2 分析方法 | 第75-76页 |
| 3.4 实验结果 | 第76-79页 |
| 3.4.1 BPDE-DNA加合物在肺癌组织细胞中的定位 | 第76-77页 |
| 3.4.2 BPDE-DNA加合物与肺癌患者临床特征的相关性分析 | 第77-78页 |
| 3.4.3 肺癌中BPDE-DNA加合物和DNA甲基化之间的关系 | 第78-79页 |
| 3.5 讨论 | 第79-81页 |
| 3.6 小结 | 第81-83页 |
| 第四章 总结和展望 | 第83-87页 |
| 4.1 总结 | 第83-84页 |
| 4.2 展望 | 第84-87页 |
| 致谢 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-95页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文 | 第95页 |
