| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| 1. 纤维素的研究进展 | 第11-13页 |
| 1.1 纤维素的分子结构 | 第11-12页 |
| 1.2 纤维素底物类型 | 第12-13页 |
| 1.2.1 可溶性纤维素底物 | 第12页 |
| 1.2.2 非溶性纤维素底物 | 第12-13页 |
| 2 纤维素酶的研究进展 | 第13-15页 |
| 2.1 纤维素酶的来源 | 第13页 |
| 2.1.1 来源于微生物的纤维素酶 | 第13页 |
| 2.1.2 来源于动物的纤维素酶 | 第13页 |
| 2.2 纤维素的组成 | 第13页 |
| 2.3 纤维素的作用机制 | 第13-14页 |
| 2.4 纤维素酶的分子结构 | 第14-15页 |
| 2.5 纤维素酶的分子生物学研究进展 | 第15页 |
| 3 大肠杆菌表达系统研究进展 | 第15-17页 |
| 3.1 大肠杆菌表达系统的特点 | 第16页 |
| 3.2 大肠杆菌 | 第16-17页 |
| 3.2.1 大肠杆菌的组成 | 第16-17页 |
| 3.2.2 外源基因的融合表达 | 第17页 |
| 4. 共表达的应用 | 第17页 |
| 5 大肠杆菌中外源基因共表达的策略 | 第17-20页 |
| 5.1 多顺反子表达系统 | 第18页 |
| 5.2 双质粒共表达系统 | 第18-20页 |
| 5.2.1 相容性双质粒共表达系统 | 第18页 |
| 5.2.2 不相容性双质粒共表达系统 | 第18-19页 |
| 5.2.3 不相容双质粒系统的影响因素 | 第19-20页 |
| 6 共表达系统的选用 | 第20页 |
| 7 本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 β-葡萄糖苷酶基因和内切葡聚糖苷酶基因在大肠杆菌中的共表达 | 第22-56页 |
| 1 实验材料 | 第22-24页 |
| 1.1 菌株与表达载体 | 第22-23页 |
| 1.2 实验所用试剂与主要溶液 | 第23-24页 |
| 1.2.1 分子生物学与化学试剂 | 第23页 |
| 1.2.2 主要溶液及酶活力测定用溶液配制 | 第23-24页 |
| 1.3 培养基及诱导溶液配制 | 第24页 |
| 1.4 实验主要仪器 | 第24页 |
| 2 实验方法 | 第24-36页 |
| 2.1 生物信息学分析 | 第24-25页 |
| 2.2 载体的构建 | 第25-29页 |
| 2.2.1 基因片段准备 | 第25页 |
| 2.2.2 引物的设计 | 第25-26页 |
| 2.2.3 目的基因的高保真酶PCR扩增 | 第26-27页 |
| 2.2.4 PCR产物的纯化回收 | 第27页 |
| 2.2.5 PCR产物的双酶切 | 第27-28页 |
| 2.2.6 表达载体片段的准备 | 第28-29页 |
| 2.2.7 载体连接 | 第29页 |
| 2.3 重组质粒的克隆转化 | 第29-30页 |
| 2.3.1 大肠杆菌(DH5α)感受态的制备 | 第29页 |
| 2.3.2 连接产物的转化 | 第29-30页 |
| 2.4 阳性克隆子的筛选及鉴定 | 第30-31页 |
| 2.4.1 菌落PCR览鉴定 | 第30页 |
| 2.4.2 质粒的酶切分析 | 第30-31页 |
| 2.5 重组质粒转化宿主菌BL21(DE3) | 第31-36页 |
| 2.5.1 大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第31页 |
| 2.5.2 重组质粒的提取 | 第31页 |
| 2.5.3 重组质粒的转化 | 第31-32页 |
| 2.5.4 重组菌株的菌落PCR及高酶活菌株的筛选 | 第32页 |
| 2.5.5 酶活力测定 | 第32-33页 |
| 2.5.6 SDS-PAGE分析和蛋白的分离纯化 | 第33-35页 |
| 2.5.7 工程菌产酶酶学性质分析 | 第35页 |
| 2.5.8 工程菌产酶发酵条件研究 | 第35-36页 |
| 3 实验结果分析 | 第36-52页 |
| 3.1 生物信息学分析结果 | 第36-39页 |
| 3.1.1 目的基因的生物信息学分析 | 第36-39页 |
| 3.2 载体的构建 | 第39-43页 |
| 3.2.1 转入BL21中共表达质粒的菌落PCR筛选 | 第42-43页 |
| 3.3 重组工程菌的IPTG诱导表达筛选 | 第43页 |
| 3.4 SDS-PAGE分析 | 第43-44页 |
| 3.5 蛋白的分离纯化 | 第44-45页 |
| 3.6 工程菌pET32a-EG-pET30b-BGL Ⅱ产酶酶学性质分析 | 第45-47页 |
| 3.6.1 工程菌pET32a-EG-pET30b-BGL Ⅱ产酶最适反应pH值测定 | 第45页 |
| 3.6.2 工程菌pET32a-EG-pET30b-BGL Ⅱ产酶pH稳定性的测定 | 第45-46页 |
| 3.6.3 工程菌pET32a-EG-pET30b-BGL Ⅱ产酶最适温度测定 | 第46页 |
| 3.6.4 工程菌pET32a-EG-pET30b-BGL Ⅱ产酶温度稳定性测定 | 第46-47页 |
| 3.7 工程菌pET32a-EG-pET30b-BGL Ⅱ产酶发酵条件研究 | 第47-52页 |
| 3.7.1 培养时间对菌体生长的影响 | 第47-48页 |
| 3.7.2 Plackett-Burman实验设计筛选影响工程菌pET32a-EG-pET30b-BGL Ⅱ产酶的重要因素 | 第48-49页 |
| 3.7.3 响应面分析确定最适产酶条件及回归方程的建立 | 第49页 |
| 3.7.4 Box-Behnken实验设计的方差分析 | 第49-50页 |
| 3.7.5 实验设计及结果 | 第50页 |
| 3.7.6 回归方程的模型验证 | 第50-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 4.1 纤维素酶的作用机理 | 第52-53页 |
| 4.2 共表达策略 | 第53-54页 |
| 4.3 基因工程菌的发酵 | 第54页 |
| 4.4 展望 | 第54页 |
| 5 结论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
