| 摘要 | 第3-11页 |
| ABSTRACT | 第11-15页 |
| 第一章 前言 | 第23-45页 |
| 1.1 基因治疗 | 第23页 |
| 1.2 基因载体 | 第23-25页 |
| 1.2.1 病毒型基因载体 | 第23-24页 |
| 1.2.2 非病毒型基因载体 | 第24-25页 |
| 1.3 基于聚酰胺-胺(PAMAM)的基因传递载体 | 第25-30页 |
| 1.3.1 PAMAM的合成方法 | 第25-27页 |
| 1.3.2 PAMAM的化学修饰 | 第27-30页 |
| 1.3.2.1 结构热活化 | 第27-28页 |
| 1.3.2.2 氨基酸修饰 | 第28页 |
| 1.3.2.3 PAMAM用于修饰生物兼容性材料 | 第28-29页 |
| 1.3.2.4 强缓冲能力试剂的修饰 | 第29页 |
| 1.3.2.5 低代PAMAM的交联反应 | 第29页 |
| 1.3.2.6 内核修饰 | 第29-30页 |
| 1.4 基于聚乙烯亚胺(PEI)的基因传递载体 | 第30-35页 |
| 1.4.1 PEI的化学修饰 | 第31-35页 |
| 1.4.1.1 大分子量PEI的化学修饰 | 第31-32页 |
| 1.4.1.2 小分子量PEI的化学修饰 | 第32-35页 |
| 1.5 基因载体PEG修饰后的常见问题及策略 | 第35-37页 |
| 1.6 阳离子聚合物介导基因的传递机制 | 第37-42页 |
| 1.6.1 细胞摄取机制 | 第38-39页 |
| 1.6.2 内涵体/溶酶体逃逸机制 | 第39-41页 |
| 1.6.3 入核的机制 | 第41-42页 |
| 1.7 本研究目的、意义和内容 | 第42-45页 |
| 第二章 PAMAM-PEI(PAPE)聚合物的合成与表征 | 第45-57页 |
| 2.1 试剂和仪器 | 第45-46页 |
| 2.2 PAMAM的合成 | 第46-47页 |
| 2.2.1 PAMAM G-0.5的合成 | 第46-47页 |
| 2.2.2 PAMAM G0的合成 | 第47页 |
| 2.2.3 PAMAM G1.5和G2.5的合成 | 第47页 |
| 2.3 PAMAM-PEI(PAPE)的合成 | 第47-48页 |
| 2.3.1 PAPE的红外光谱分析 | 第48页 |
| 2.3.2 PAPE的~1H NMR分析 | 第48页 |
| 2.3.3 PAPE的GPC分析 | 第48页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第48-56页 |
| 2.4.1 PAMAM的合成 | 第49-50页 |
| 2.4.2 PAPE的合成 | 第50页 |
| 2.4.3 PAPE的红外表征 | 第50-52页 |
| 2.4.4 PAPE的~1H NMR分析 | 第52-54页 |
| 2.4.5 PAPE的GPC分析 | 第54-55页 |
| 2.4.6 PAPE的结构分析 | 第55-56页 |
| 2.5 本章小结 | 第56-57页 |
| 第三章 PAPE/pDNA复合物的制备及物理性能 | 第57-69页 |
| 3.1 试剂和仪器 | 第57-58页 |
| 3.2 LB培养基的配制 | 第58页 |
| 3.3 质粒的转化 | 第58-59页 |
| 3.4 pEGFP-C1的大提 | 第59-60页 |
| 3.5 PAPE/pDNA复合物的制备 | 第60页 |
| 3.6 PAPE对pDNA的压缩能力和保护能力分析 | 第60-61页 |
| 3.7 PAPE/pDNA复合物的粒径,电位和形态的测定 | 第61页 |
| 3.8 统计学分析 | 第61页 |
| 3.9 结果与讨论 | 第61-68页 |
| 3.9.1 质粒的转化和提取 | 第61-62页 |
| 3.9.2 凝胶电泳分析PAPEs的基因压缩能力 | 第62-63页 |
| 3.9.3 PAPE/pDNA的抗核酸酶降解分析 | 第63-64页 |
| 3.9.4 PAPE/pDNA的粒径、电位和形态测定 | 第64-68页 |
| 3.10 本章小结 | 第68-69页 |
| 第四章 PAPE的基因转染活力及毒性评估 | 第69-83页 |
| 4.1 试剂,细胞和仪器 | 第69-70页 |
| 4.2 试验方法 | 第70-71页 |
| 4.2.1 细胞培养 | 第70页 |
| 4.2.2 体外转染 | 第70页 |
| 4.2.3 细胞毒性评估 | 第70-71页 |
| 4.3 统计学分析 | 第71页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第71-82页 |
| 4.4.1 聚合物PAPE的体外转染 | 第71-78页 |
| 4.4.2 PAPE及其基因复合物的毒性评估 | 第78-82页 |
| 4.5 本章小结 | 第82-83页 |
| 第五章 PAPE/pDNA复合物的转染机理初探 | 第83-98页 |
| 5.1 试剂和仪器 | 第83-84页 |
| 5.2 试验方法 | 第84-86页 |
| 5.2.1 荧光素标记的DNA制备 | 第84-85页 |
| 5.2.2 PAPE/pDNA复合物的摄取途径 | 第85页 |
| 5.2.3 PAPE/pDNA复合物经CvME摄取的基因表达动力学 | 第85页 |
| 5.2.4 PAPE/pDNA复合物的胞内运输 | 第85页 |
| 5.2.5 氯喹和aphidicolin对转染的影响 | 第85-86页 |
| 5.3 统计学处理 | 第86页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第86-97页 |
| 5.4.1 质粒DNA的荧光素标记 | 第86页 |
| 5.4.2 PAPE/pDNA复合物的摄取途径 | 第86-90页 |
| 5.4.3 PAPE/pDNA的基因表达动力学 | 第90-92页 |
| 5.4.4 PAPE/pDNA复合物的胞内过程 | 第92-94页 |
| 5.4.5 氯喹与aphidicolin对PAPE/pDNA复合物转染效率的影响 | 第94-97页 |
| 5.5 本章小结 | 第97-98页 |
| 第六章 PME的合成、表征及生物学性能评价 | 第98-111页 |
| 6.1 试剂、仪器及细胞 | 第98-99页 |
| 6.2 试验方法 | 第99-100页 |
| 6.2.1 PAMAM G2.5-PEI 423共聚物(PME)的合成 | 第99页 |
| 6.2.2 PME的结构分析 | 第99页 |
| 6.2.3 细胞培养 | 第99-100页 |
| 6.2.4 转染 | 第100页 |
| 6.2.5 细胞毒性评估 | 第100页 |
| 6.3 统计学分析 | 第100-101页 |
| 6.4 结果与讨论 | 第101-110页 |
| 6.4.1 PME的合成与表征 | 第101-103页 |
| 6.4.2 聚合物PME转染HEK 293T细胞 | 第103-105页 |
| 6.4.3 聚合物PME/pDNA在最优比转染多种细胞系 | 第105-108页 |
| 6.4.4 聚合物PME的细胞毒性 | 第108-110页 |
| 6.5 本章小结 | 第110-111页 |
| 第七章 PME-PEG-FA共聚物的合成、表征及其生物相容性评估 | 第111-128页 |
| 7.1 试剂和仪器 | 第112页 |
| 7.2 试验方法 | 第112-115页 |
| 7.2.1 COOH-PEG_(3.4k)-FA_1和COOH-PEG_(3.4k)-FA_2的合成 | 第113页 |
| 7.2.2 PME-PEG_(3.4k)-FA_1,PME-PEG_(3.5k),PME-PEG_(3.4k)-FA_2的合成 | 第113-114页 |
| 7.2.3 聚合物的表征 | 第114页 |
| 7.2.4 细胞毒性 | 第114页 |
| 7.2.5 溶血分析 | 第114-115页 |
| 7.3 统计学分析 | 第115页 |
| 7.4 结果与讨论 | 第115-127页 |
| 7.4.1 COOH-PEG_(3.4k)-FA_1和COOH-PEG_(3.4k)-FA_2的合成及表征 | 第115-117页 |
| 7.4.2 PME-PEG_(3.4k)-FA_2,PME-PEG_(3.4k)-FA_1,PME-PEG的合成及表征 | 第117-121页 |
| 7.4.3 聚合物及其基因复合物的细胞毒性和复合物的溶血分析 | 第121-127页 |
| 7.5 本章小结 | 第127-128页 |
| 第八章 聚合物/pDNA复合物的物理性能及体外转染研究 | 第128-138页 |
| 8.1 试剂和仪器 | 第128-129页 |
| 8.2 试验方法 | 第129页 |
| 8.2.1 琼脂糖凝胶阻滞实验 | 第129页 |
| 8.2.2 PME-(PEG_(3.4)k-FA_2)_(1.72)/pDNA复合物的粒径和电位测量 | 第129页 |
| 8.2.3 体外转染 | 第129页 |
| 8.3 统计学分析 | 第129-130页 |
| 8.4 结果与讨论 | 第130-136页 |
| 8.4.1 压缩能力分析 | 第130-131页 |
| 8.4.2 粒径、电位测定 | 第131-132页 |
| 8.4.3 聚合物的体外转染 | 第132-136页 |
| 8.5 本章小结 | 第136-138页 |
| 第九章 PME-(PEG_(3.4k)-FA_2)_(1.72)/pDNA复合物的细胞摄取 | 第138-148页 |
| 9.1 试剂和仪器 | 第138-139页 |
| 9.2 2D细胞摄取 | 第139页 |
| 9.3 3D多细胞球体的摄取 | 第139-140页 |
| 9.4 统计学分析 | 第140页 |
| 9.5 结果与讨论 | 第140-147页 |
| 9.5.1 2D细胞摄取分析 | 第140-145页 |
| 9.5.2 3D细胞摄取分析 | 第145-147页 |
| 9.6 本章小结 | 第147-148页 |
| 第十章 PME-(PEG_(3.4k)-FA_2)_(1.72)/pDNA复合物的细胞摄取机制 | 第148-156页 |
| 10.1 试剂和仪器 | 第148页 |
| 10.2 叶酸竞争性试验和摄取途径 | 第148-149页 |
| 10.3 统计学分析 | 第149页 |
| 10.4 结果与讨论 | 第149-155页 |
| 10.4.1 载体的细胞特异性和摄取途径分析 | 第149-155页 |
| 10.5 本章小结 | 第155-156页 |
| 参考文献 | 第156-173页 |
| 全文总结与创新点 | 第173-175页 |
| 中英文缩写词表 | 第175-178页 |
| 致谢 | 第178-180页 |
| 攻读博士期间论文成果 | 第180-182页 |
| 统计学审稿证明 | 第182页 |
